微生物综合实验报告

报告人：朱昕悦 班级：生科4班 年级：14

组别：周五下午第1组 同组人：陈帷宏 张意铄 马超男 江顺 一：目的与要求

除草剂阿特拉津等降解菌株的筛选：除草剂大量使用在消除杂草危害、提高劳动生产率的同时，大量除草剂残留引起严重的土壤、水体和食品污染，对作物产生了严重的药害并危害生态环境和人类健康。除草剂生物修复及其安全性和高效性日益重视，具有非常重要的环境保护价值。

二：实验所需微生物的获取

土壤——富集（土1克，于9ml LB培养基或无菌水）30℃5小时——原液、梯度稀释10000倍。涂布（0.2ml-0.5ml于平板，刮刀涂布）——菌落描述——划线分离——纯种保存。（培养基纯化）

根据平板计数。

三：实验材料方法

实验材料

筛选培养基

筛选降解乙草胺、苯磺隆的微生物

筛选基础培养基：氯化钠0.5g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾1.5g，7水合硫酸镁0.5g，硝酸铵1g，琼脂粉18g，pH7.0。

115℃灭菌30分钟后，加入100mg L-1的乙草胺、苯磺隆作为唯一碳源。 筛选降解阿特拉津的微生物

筛选基础培养基（L-1）：蔗糖5g，氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾1.5g，7水合硫酸镁0.5g，硝酸钠1g，琼脂粉18g，pH7.0。 115℃灭菌30分钟后，加入100mg L-1的阿特拉津作为碳源。

二．筛选方法

1.平板涂布：取土样1g溶解在9g的灭菌生理盐水中，震荡均匀后，取100l至筛选平板，用三角刮刀涂布均匀。

菌株分纯：30℃倒置培养三天后，挑取生长菌落再次在筛选平板上划线分离。 菌种保藏：挑取单一菌落至对应的筛选培养基斜面，4℃保存。 微生物基本鉴定：（没有目标菌，任选菌种6种）

革兰氏染色：确定阳或负；杆菌或球菌；是否芽孢（标准株） 芽孢染色：芽孢位置及形态

活菌观察及半固体穿刺：确定运动性

生理生化实验

根据 基本鉴定 查《伯杰手册》把微生物归于某类某属，根据《伯杰手册》该属的生理生化特性。安排生理生化实验。作为定属依据。

菌种保存

所分菌种，斜面保存每种3支，注意写明出处及日期。

三：实验步骤

（第一次实验失败，从12月15日起重新安排并开始实验）

12月15日：

配制30ml LB培养基，100ml牛肉膏蛋白胨培养基，200ml筛选1培养基，200ml筛选2培养基，200ml 水112℃灭菌20分钟后常温保存。准备平皿35套备用。 12月16日：

上午10：30：取3，4，6，8号土样各 g于试管中，各加入10ml无菌水，贴标签常温放置5小时。再取4号土样 1g于试管中，加入10ml LB液体培养基，贴标签常温放置5小时后稀释。

下午15：00：将35套平皿灭菌待用，将牛肉膏蛋白胨培养基，筛选培养基1号，2号融化，在超净台中在筛选培养基中加入相应农药，倒9套牛肉膏蛋白胨平板，12套筛选1培养基平板，12套筛选2培养基平板。取4号LB培养基浸泡土样按10的-1，-2，-4次方的梯度用无菌水稀释，涂布于牛肉膏蛋白胨平板上，每个浓度梯度涂布3个平板，倒置于30℃培养箱过夜培养。将3，4，6，8号无菌水浸泡土样试管分别涂布于筛选1，2号培养基上，每个土样涂布每种筛选培养基3个，倒置30℃培养箱培养。 12月17日：

下午17点：洗6套平皿并配置150ml牛肉膏蛋白胨培养基灭菌倒平板，取3个16日培养的10的-4次方浓度菌液平板计数，数据分别为34，40，47。

在16日9个牛肉膏蛋白胨平板上取单菌落6个划线，于30℃培养箱倒置培养。 12月18日：

下午18:30：在17日6个划线平板中取4个重新划线培养。

12月19日：

下午20:00：18日富集培养基的菌重新划线培养。

从16日筛选1，2培养皿中挑取单个菌落16个，于灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基内划线，取菌也做好标记，置于30℃培养箱倒置培养。

12月20日：

上午10:00：取4支试管，做4个牛肉膏蛋白胨斜面，取19日重新划线的4个富集培养基菌平板取单个菌落划斜面30℃培养。

从19日培养的筛选培养基选取的16种菌中取10中菌重新划线培养。

12月21日：

将20日富集培养基菌斜面于-4℃冰箱菌种保藏。

将20日筛选培养基的10种菌进行第三次划线分离。

12月22日：

从筛选培养基中取10个菌落在牛肉膏蛋白胨斜面上培养过夜。在牛肉膏蛋白胨斜面上接种大肠杆菌和金色葡萄球菌。 12月23日：

从10种菌株中选取6种菌株进行油脂，淀粉，半固体培养基的配制，在油脂平板上对每个菌种进行两次平行十字划线，在淀粉平板上进行两次平行点种，将每个菌种在半固体培养基中进行穿刺培养。并对6种菌进行芽孢染色观察。 12月24日：

分别做了葡萄糖、乳糖糖酵解培养基，并接种6种菌。对6种菌进行革兰氏染色观察。对23日油脂、淀粉、半固体培养基的结果进行观察统计。配制吲哚及甲基红培养基并灭菌。 12月25日：

在甲基红和和吲哚培养基中进行菌种接种，并观察葡萄糖、乳糖糖酵解观察。 12月26日：

对甲基红和吲哚培养基培养结果进行观察，并对筛选培养基选取的6种菌种保存。

四：实验数据

1、富集培养基10-4梯度计数：34，40，47 则4号土样中的菌含量

*104=400000（个）

 

第二篇：微生物肠杆菌科综合实验报告

        肠

道杆菌实验论文

班级：检验一班                        实验日期：20##-09-24~30

实验组：第二组                         指导老师：

综合实验报告

专业班级： 医学检验       时间：2013年 9月 24日～9月30日

实验名称       肠道杆菌                   指导教师   熊亚南

一、预习报告

1.    实验目的

1.1掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。

1.2掌握肠道杆菌的主要生化反应。

1.3掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。

1.4掌握粪便标本细菌学检测流程

2.    实验基本原理

肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。

这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。

3.    实验流程图

 

4.         主要仪器设备

高压灭菌锅 试管 锥形瓶 接种环 酒精灯 无菌玻片 显微镜、载玻片 镊子

二、实验报告

1.材料与方法

1.1材料

2号菌液 双糖铁培养基 CB培养基 SS培养基 基础培养基 青霉素 庆大霉素 氯霉素 复方新诺明 志贺氏诊断血清 沙门氏诊断血清 无菌生理盐水、结晶紫染液、卢戈碘液、95%乙醇溶液、稀释石碳酸复红染液、无水乙醇、松柏油

          

1.2方法

1.2.1标本分离

将菌种用平板划线法，分别接种于CB和SB培养基中，37℃温室培养24小时，进行菌落分离。

操做人：

1.2.2 鉴别实验

1.2.2.1 双糖铁实验

用接种针以无菌操作技术挑取可疑菌落，立即垂直插入培养基中心至接近管底处，再循原路退出到斜面上；接种针自斜面最低处向上划一直线（要求通过试管培养基的中心点），然后再从斜面低处向上轻轻来回作蜿蜒划线；接种完毕，盖好试管塞。贴上标签纸。37℃培养18~24小时，取出观察结果并分析 ，观察结果。

1.2.2.2 Gram stain实验

1.2.2.2.1 涂片

于洁净无油的载玻片上,加无菌生理盐水一滴,按无菌操作法用接种环取待检标本少许，研入无菌盐水中，使成一个均匀、极薄菌膜，直径在1cm 左右。

1.2.2.2.2干燥

使涂片自然干燥

1.2.2.2.3固定

将玻片涂有菌膜的面向上迅速地往返通过火焰２－３次，以玻片触及皮肤，热而不烫为度。

1.2.2.2.4初染

在制作的涂片上滴加结晶紫染液，1min后水洗，并将片上积水轻轻洒净

1.2.2.2.5媒染

加卢戈碘液，1min后水洗，并将片上积水洒净

1.2.2.2.6脱色

加95%乙醇溶液数滴于涂片上，频频摇3-5s后，斜持玻片，使乙醇溶液流去，再加乙醇溶液。如此反复２－３次，直至流下的乙醇溶液无色或稍呈淡紫色时为止（约30s）。水洗，轻轻洒去片上积水。

1.2.2.2.7复染

以稀释石碳酸复红染液1min后，水洗，待干或用吸水纸印干，油镜检视。

1.2.2.3血清学实验

取一块无菌玻片，平均分成两区，分别滴上志贺和沙门氏诊断血清，用接种环取在双糖铁培养基斜面上培养的可疑菌种分别与玻片上的两种血清混匀，注意每换一种血清时应用火焰灭菌再取菌落，以防交叉感染。混匀后等待实验结果并观察

操做人：

1.2.4 药敏实验

1.2.4.1 用灼烧过的接种环取可疑菌种，做来回划线，使之密密涂满于基础培养基表面。

1.2.4.2 将镊子经酒精灯灼烧后夹取含青霉素、庆大霉素、复方新诺明、氯霉素的纸片贴于含菌培养基表面并轻压，纸片应贴得均匀，纸片贴牢后避免移动。

1.2.4.3 37℃孵育24h，观察各消毒剂周围有无抑菌圈，比较各抑菌圈大小。

1.2.4.4  从平板背面用直尺测包括纸片直径在内的抑菌圈直径，记录结果。

操做人：

2.结果

2.1标本分离

CB培养基平板未变色，SS培养基在同一个平板上部分由原来红色变为黄色，则SS平板仍为红色培养基上的单个菌落为可疑菌落。

2.2 鉴别实验

2.2.1双糖铁试验结果

所有培养基均是斜面为红色，底层培养基生成黑色沉淀，斜面培养基与底层培养基有部分分离。则该菌种能分解葡萄糖产酸产气，不分解乳糖，并且能产黑色沉淀。如图2-1所示：

图1-1双糖铁培养基发酵试管

2．2.2血清学实验结果

通过实验，观察到在滴有沙门氏诊断血清中发生凝集反应，且志贺氏诊断血清没有变化。如图2-2所示：

图1-2血清学试验结果

2.2.3革兰氏染色结果

在显微镜下观察到可疑菌被染成红色，则该菌为革兰氏阴性菌。

2.3 药敏实验

药敏试验抗生素抑菌圈的大小

图1-3药敏试验结果图

3.结论

3.1通过鉴定试验，确定该2号菌为沙门氏菌

3.2通过药敏试验分析，该菌种对庆大霉素最为敏感

4.自评反馈

经过本次试验，我们通过团队密切合作，组员各自分工明确，在大家的共同努力下，实验成功的结束了。

在本次实验中我们有做的好的地方：因为本次接种的是致病性的菌种，所以全部接种过程都在酒精灯附近进行试验操作，做好灭菌，操作非常谨慎。在倒平板时，快速，稳健的倾倒。实验结果观察非常细心，真实的记录实验现象，实验结果，应用科学严谨的态度，在测量时反复测量求平均值，避免人为的误差。

也有差强人意的地方：在用平板划线法接种过程中，由于操作手法不熟练，琼脂板被破坏。

在以后的实验中，本组队员将再接再厉，认真的对待每一个实验，细心，耐心的得出实验结果。

参考文献

http://www.doc88.com/p-40095474739.html

http://www.docin.com/p-97935809.html