实验一  凝集试验

颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。

细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。

凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。

[目的要求]

1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。

2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。

3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。

[材料与试剂]

1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。

2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。

3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。

4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。

[实验内容及操作方法]

（一）试管凝集试验

以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。

1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。如被检血清有多份，对照只需做1份。

2. 被检血清稀释：第1管加入2.3 ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml ，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml 弃之，再吸取0.5 ml 加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml 加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml （见表1-1）。该被检血清的稀释度分别是1:12.5、1:25、1:50、1:100。

3. 对照管制作：第5管中加0.5% 石炭酸生理盐水0.5 ml ，第6管加1:25稀释的布氏杆菌病阳性血清0.5 ml ，第7管加1:25稀释的布氏杆菌病阴性血清0.5 ml 。

4. 加抗原：将布氏杆菌病试管凝集抗原用0.5% 石炭酸生理盐水作1:20稀释，每支试管加0.5 ml 。

  表1-1 布氏杆菌病试管凝集试验术式表（单位：ml）

弃1.5                       弃0.5

5. 感作（反应）：7支试管加完抗原后，充分混匀，置于37℃温箱中4-10h，取出后置室温18-24h（或37℃温箱12-14h，取出后置室温2-4h；或37℃温箱中22-24 h取出），然后观察并记录结果。

6. 结果判定：判定结果时用“+”表示反应的强度。根据各管中上清液的透明度、抗原被凝集的程度及凝集块的形状，来判定凝集反应的程度。

＋＋＋＋：100％抗原凝集，上清液完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒状。

＋＋＋：75％抗原凝集，上清液略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况如上。（管底凝集物与100%凝集时相同，只是上清液稍浑浊）。

＋＋：50％抗原凝集，上清液浑浊半透明，管底有中等量的凝集物（管底有明显的凝集）。

＋：25％抗原凝集，上清液完全浑浊不透明，管底有少量凝集物或凝集的痕迹。

－：抗原完全未凝集，上清液完全浑浊不透明，但由于菌体的自然下沉，在管底中央出现规则的菌体自沉圆点，振荡后立即散开呈均匀混浊。

7. 判定标准：能使50% 抗原凝集的血清最高稀释度称为该血清的凝集价（或称滴度）。

牛、马和骆驼的血清凝集价大于或等于1:100，判为阳性，1:50的凝集价判为疑似反应（可疑）；猪、绵羊、山羊和狗的血清凝集价大于或等于1:50，判为阳性，1:25的凝集价判为疑似反应（可疑）。

[注意事项]

1. 实验时必须设抗原、阳性血清及阴性血清对照，以避免假阳性、假阴性的结果。

2. 结果判为可疑时，隔2-3周后采血重做。阳性畜群，重检时仍为可疑，可判为阳性。对同群中既无临床症状又无凝集反应阳性者，马、猪重检仍为可疑，判阴性；牛、羊重检仍为可疑者，可判为阳性，或以补体结合反应核对。

（二）布氏杆菌病平板凝集试验

1. 加血清：取洁净玻板一块，用蜡笔划成方格（4cm²），并注明被检血清号码，以100mL微量可调加样器按下列量加被检血清于方格内，第l格80mL、第2格40mL、第3格20mL、第4格10mL。血清用前需放室温，使其温度达20℃左右。每一份检样需换一个tip头。

大规模检疫时，允许只用两个血清量作试验，牛、马、骆驼用40mL 和20mL ；猪、山羊、绵羊、狗用80mL和40mL。

2. 加抗原：每格加布氏杆菌病平板凝集抗原30mL，滴在血清附近，而不与血清接触。从血清量最少的一格起，用牙签将血清与抗原混匀，一份血清用一根牙签。

抗原用前摇匀，并置室温使其温度达20℃左右。

3. 作用：混和完毕后，将玻板置恒温箱中或采用别的办法适当加温，使温度达到30℃左右，3-5min内记录反应结果。

4. 对照：每次试验须用标准阳性血清和阴性血清以及生理盐水作对照。

5. 结果判定：按下列标准记录反应结果。

＋＋＋＋：出现大的凝集块，液体完全透明，即100% 凝集。

＋＋＋：有明显凝集块，液体几乎完全透明，即75% 凝集。

＋＋：有可见凝集块，液体不甚透明，即50% 凝集。

＋：液体混浊，有小的颗粒状物，即25% 凝集。

－：液体均匀混浊，无凝集现象。

6. 平板凝集试验与试管凝集试验的关系见表1-2。

表1-2  平板凝集试验与试管凝集试验的关系

7. 判定标准：同试管凝集试验。

8. 注意：对于阳性及可疑的被检血清需用试管凝集试验进行验证。

（三）虎红平板凝集试验

这种试验是快速平板凝集试验。抗原是布氏杆菌加虎红制成。虎红平板凝集试验可与试管凝集试验及补体结合试验效果相比，具有操作简单、快速、特异性强的优点。

1. 被检血清和布氏杆菌病虎红平板凝集抗原各30mL滴于玻璃板的方格内，每份血清各用一支牙签或火柴棒混合均匀。在室温（20℃）4-10min内记录反应结果。同时以阳、阴性血清作对照。

2. 结果判定：在阳性血清及阴性血清试验结果正确的前提下，被检血清出现任何程度的凝集现象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可疑反应。

3. 注意：抗原用前充分摇匀，抗原和被检血清用前应放室温30-60min后再进行试验。

（四）鸡白痢平板凝集试验

1. 被检鸡血清和鸡白痢平板凝集抗原各1滴（约30mL）滴于玻板或载玻片上，用牙签或火柴棒充分混合。

2. 结果判定：在室温（20℃）下，观察30-60s，凝集者为阳性，不凝集者为阴性。

[思考题]

1. 凝集反应的原理是什么?

2. 哪些因素影响细菌凝集试验?

3. 凝集试验中为什么要设阳性、阴性血清及抗原对照？

实验二  病毒的血凝及血凝抑制试验

有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。

[目的要求]

掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。

[材料与试剂]

1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50mL定量移液器，滴头，微型振荡器。

2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。

3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。

[实验内容及操作方法]

（一）血球凝集(HA)试验   

1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50mL生理盐水。

2. 于左侧第1孔加50mL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50mL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50mL；第12孔为红细胞对照。

3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50mL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。

表 4-1  病毒血凝试验的操作方法（单位：mL）

                                                              

4. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。

以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。

(二) 血球凝集抑制(HI)试验  

1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。

2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50mL生理盐水。

3. 第１孔加被检鸡血清50mL，吹吸混合均匀，吸50mL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50mL，稀释度分别为：1:２、1:4、1:8 …… ；第12孔加新城疫阳性血清50mL，作为血清对照。

4. 自第1孔至12孔各加50mL 4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照，振荡混合均匀，置室温中作用10min 。

5. 自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50mL，振荡混合均匀，室温下静置后观察结果（表4-2）。

表4-2  病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：mL）

6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（++++），而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可进行结果观察。

以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。

从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的负对数(-log2)表示，即6log2。

附       录

1. 阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液

枸橼酸钠（5H₂O）    0.80g

枸橼酸（H₂O）       0.055g

葡萄糖             2.05g

氯化钠             0.42g

双蒸水    加至     100 ml

将以上试剂加热溶解于双蒸水中，调整pH至6.8，115℃灭菌10min,4℃保存备用。

2. 0.5% 鸡红细胞制备方法

先用灭菌注射器吸取3.8% 枸橼酸钠溶液(其量为所需血量的1／5)，从鸡翅静脉或心脏采血至需要血量，置灭菌离心管内，加灭菌生理盐水为抗凝血的2倍，以2000r/min离心10min，弃上清液，再加生理盐水悬浮血球，同上法离心沉淀，如此将红细胞洗涤三次，最后根据所需用量，用灭菌生理盐水配成0.5% 鸡红细胞悬液。

3. 96孔微量反应板的清洗

将浸泡有75% 乙醇的棉签放入微量反应板的每个孔内旋转，用自来水冲洗反应板5次，再用蒸馏水冲洗3次以上，置37℃温箱中干燥。

[思考题]

1. HA和HI试验的原理是什么？

2. HI试验是不是特异的抗原抗体反应，为什么?

3. HA和HI试验有何实际应用意义？

 

第二篇：统计学实验报告及答案

统计学

实验课第一次作业

数据整理案例管理报告:

个人支票 信用卡

平均 8.84 平均 42.732 平均 40.87682 标准误差 0.856497 标准误差 2.470033 标准误差 3.171108 中位数 7.405 中位数 41.34 中位数 45.33 众数 #N/A 众数 #N/A 众数 #N/A 标准差 5.2798 标准差 15.62186 标准差 14.87382 方差 27.87629 方差 244.0425 方差 221.2304 峰度 -0.85908 峰度 0.266625 峰度 -1.00003 偏度 0.435257 偏度 -0.03301 偏度 -0.11736 区域 19.39 区域 75.49 区域 55.33 最小值 1.09 最小值 2.67 最小值 14.44 最大值 20.48 最大值 78.16 最大值 69.77 求和 335.92 求和 1709.28 求和 899.29 观测数 38 观测数 40 观测数 22 置信度置信度

1.735427 4.996113 置信度(95.0%) 6.594681

(95.0%) (95.0%) 1）平均数：现金（8.84），个人支票（42.732），信用卡（40.87682），由上可知，支付金额越大，人们首先会选择用个人支票支付，其次是信用卡，再来是现金。 众数：现金（7.405），个人支票（41.34），信用卡（45.33），

由上可知，支付金额越大，人们首先会选择用信用卡支付，其次是个人支票，再来是现金。

现金

2）极差=最大值-最小值，现金（19.39），个人支票（75.49），信用卡（55.33）, 由上可知，支付金额越大，人们首先会选择用个人支票支付，其次是信用卡，再来是现金。 标准差（由表可知）,现金（5.2798），个人支票（15.62186），信用卡（14.87382） 由上可知，用现金支付的代表性最大，其次是信用卡，再来是个人支票。 标准差系数=标准差/平均数*100%，现金（59.73%），个人支票（36.56%），信用卡（36.387%），由上可知，用信用卡支付的代表性最大，其次是个人支票，再来是现金。

3）总的来说，对于较大金额的交易，客户常采用个人支票和信用卡来支付，而对于小金额，较普遍的交易，客户常采用现金来支付。

区间估计案例管理报告：

1）

资产（百万美元） 平均 标准误差 中位数 众数 标准差 方差 峰度 偏度 区域 最小值 最大值 求和 观测数 置信度(95.0%)

过去7日的获益率（％）

过去30日的获益率（％）

4.098222 0.048485

4.13 4.13 0.32525 0.105788 9.300356 -2.05078

2.12 2.61 4.73 184.42

45 0.097716

1994.79111 平均 692.305633 标准误差

496.5 中位数 #N/A

众数

4.162222222 平均 0.048632708 标准误差

4.18 中位数 4.17 众数

0.326238123 标准差 0.106431313 方差 9.254828562 峰度

4644.12737 标准差 21567919 方差 19.9494643 峰度 4.1996878 偏度 27003.9 区域 1.7 27005.6 89765.6

45

最小值 最大值 求和 观测数

-2.074217808 偏度

2.12 区域

最小值 最大值 求和 观测数 置信度

0.098012782

(95.0%)

2.67 4.79 187.3 45

1395.25031 置信度(95.0%)

2）由上表可知，货币市场基金总体的资产均值为1994.79111百万美元。

最近7天的获益率95％置信区间估计为：（4.06427092，4.26017352）由公式（平均数-TINV（0.05，46-1）*标准差/SQRT（观测值），平均数+TINV（0.05，46-1）*标准差/SQRT（观测值））。 最近30天的获益率的95％置信区间估计为：（4.000567548，4.195876897）由公式（平均数-TINV（0.05，46-1）*标准差/SQRT（观测值），平均数+TINV（0.05，46-1）*标准差/SQRT（观测值））。

管理上的解释：有95%的把握认为最近七天的获益率在4.06427092和4.26017352之间变化，而有95%的把握认为最近30天的获益率在4.000567548和4.195876897之间变化。

3）应将最近7天和30天的获益率的95%置信区间估计列出来，以便客户能根据该数据作出正确的决策，加大可信程度。

假设检验案例管理报告：

平均 标准误差 中位数 众数 标准差 方差 峰度 偏度 区域 最小值 最大值 求和 观测数 置信度(95.0%)

264

270.4358974 1.410293215

270 263

8.807278305 77.56815115 -0.78776409 0.261124806

34 255 289 10547 39

277

267.2564 1.585919

264 263 9.904061 98.09042 -0.44396 0.299229

39 250 289 10423

39 3.210525

平均 标准误差 中位数 众数 标准差 方差 峰度 偏度 区域 最小值 最大值 求和 观测数 置信度

2.85498933

(95.0%)

z-检验: 双样本均值分析

264 平均 270.435897 已知协方差 77.56815 观测值 39

277 267.2564 98.09042

39

假设平均差 0 z 1.49814797 P(Z<=z) 单

0.06704741

尾

z 单尾临界 1.64485363 P(Z<=z) 双

0.13409481

尾

z 双尾临界 1.95996398 1) H0:u1=u2,H1:u1<>u2

2) 若置信水平为95%，1.49814797<1.64485363,从而不能拒绝H0，即可认为新的耐磨球与当前型号的高尔夫球有相同的击球距离。

3) 若置信水平为95%，误差为：当前型号的高尔夫球：2.764174702，新的耐磨球：3.108401152。（由公式Za/2*σ/SQRT(观测值)可得）。如若认为此误差为大，则应增大样本容量进行进一步检验。