实验七、酶的特性（唾液淀粉酶性质的研究）

［目的要求］

1、进一步学习和了解酶的性质。

2、学会检查酶的性质的原理和方法。

［实验原理］

酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异（专一）性，即一种酶只能对一种底物或一类底物（此类底物在结构上通常具有相同的化学键）起催化作用，对其他底物无催化反应。例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。

    通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。

温度、PH对淀粉活性影响酶的催化活性受到温度的影响，在一定温度范围内，酶才有活性，且在最适温度下，酶反应速度最大。大多数动物酶的最适温度为37℃-40℃，植物酶的最适温度为50℃-60℃。对温度的稳定性与其存在形式有关，有些的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显变，但在100℃的溶液中很快地完成失去活性。低温能降低或抑制的活性，但不能使失活。

酶的激活和抑制作用酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。 某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。

［实验材料与设备］

器材：试管和试管架、试管夹、恒温水浴箱、烧杯、冰浴（冰箱）、沸水浴（电磁炉）、移液管。

试剂：0.2%淀粉-0.3% NaCl液、0.1%淀粉、1%淀粉-0.3% NaCl液、1%CuSO₄、1%NaCl、1%Na₂SO₄、2%蔗糖溶液，碘化钾-碘溶液，斑氏试剂。

［实验步骤］

一、酶液的提取。

（1）唾液淀粉酶的制备。

二、酶的活性检验

（1）        温度对酶活性的影响。

摇匀，保持各自温度继续反应，5分钟后每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。

注：*2号管冰浴10分钟后分成二半、一半加碘试剂一半37℃保温10min后加碘试剂。

（2）        激活剂和抑制剂。

试说明本实验第3号管的意义，并推出Cl^-和Cu²⁺各是唾液酶的激活剂还是抑制剂？举例说明抑制与变性剂有何异同？

三、的专一性

四、结果处理

讨论题：为何温度的控制是实验成败的关键？

五、注意事项：

1)         激活剂抑制剂实验中淀粉酶要最后加（为什么？）

2)         加入淀粉时要小心，不要沾到试管壁；另外，摇匀时也不宜用力过猛，使淀粉溶液或淀粉粒过多地沾在试管壁上，这样会影响结果的观察，误差较大。

3)         反应结果如不明显调节保温时间和酶液浓度。

4)         温度结果要先准备好煮沸的酶液和冰浴再加入试剂。冰浴处理10分钟后的那支试管内的溶液要取约一半放在室温继续反应。

琼州学院实验项目卡

生命科学系  生化实验室    开设日期___年___月___日

实验教师签名______________________

                      实验员（管理员）签名______________

 

第二篇：唾液淀粉酶实验

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验

实验目的

1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。

2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。

3．熟悉影响酶促反应速度的因素。

实验原理

1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。

2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。

实验器材

仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。
试剂药品： 0.02％淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液  碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。

实验步骤：

1、缓冲液的配置

    pH       0.2mol/L                0.2mol/L

NaH₂PO₄(ml)           Na₂HPO₄(ml)

5.7           93.5                       6.5

5.8           92.0                       8.0

5.9           90.0                     10.0

6.0           87.7                     12.3

6.1           85.0                     15.0

6.2           81.5                     18.5

6.3           77.5                     22.5

6.4           73.5                     26.5

6.5           68.5                     31.5

6.6           62.5                     37.5

6.7           56.5                     43.5

6.8           51.0                     49.0

6.9           45.0                     55.0

7.0           39.0                     61.0

7.1           33.0                     67.0

7.2           28.0                     72.0

7.3           23.0                     67.0

7.4           19.0                     81.0

7.5           16.0                     84.0

7.6           13.0                     87.0

7.7           10.5                     89.5

7.8             8.5                     91.5

7.9             7.0                     93.0

8.0             5.3                     94.7

2、唾液的取法：

（1）先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一块消毒脱脂棉球用镊子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分钟，备取者感觉棉球湿透，用镊子将棉球取出，置于烧杯中，倒入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备用液。

（2）让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。

（3）准备一个干净的杯子，用手扯住嘴角，等待大约2分钟后，就可以获得唾液。

实验方案

（1）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09

编号    0   1    2     3    4    5     6    7    8    9
唾液  0.1  0.1   0.1    0.1   0.1   0.1   0.1  0.1  0.1  0.1

蒸馏水 4.9 9.9  14.9  19.9  24.9  29.9  34.9  39.9  44.9 49.9
(2)最适唾液稀释倍数的选取

取上述稀释的唾液各1ml，分别加入另取的10支试管中，分别编上A~J号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴几分钟后取出，滴加1～2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变为淡黄色最快的一支，记录其稀释倍数，作为下面实验的最适唾液稀释倍数。

（3）最适PH的测定

编号   1    2    3    4    5    6    7    8    9

PH

颜色

A660

实验结果

最适PH=？

实验分析

思考题

1）本实验为什么要寻找较合适的唾液稀释倍数？

答：为了跟好的找到唾液淀粉酶的合适浓度，是的最后测定的最适PH精确。

2）在研究PH对酶促反应速度的影响是，前提条件是什么？

答：温度，底物浓度，酶浓度保持恒定。

3）所测吸光度中，吸光度值最小溶液所对应的PH一定是唾液淀粉酶的最适PH吗？

答：不一定，最适PH值应当是根据A-PH的图来确定，图的最低点为最适PH，不一定就是所测最小的吸光度值。

4）总结本实验的注意事项

①使用分光光度计时要调零

②反应时必须是在37℃的水浴中。

参考文献

常东胜，潘洪明   医学化学实验     科学出版社