【板 书】

实验六  考马斯亮兰G250染色法测定人体血清蛋白含量

实验目的：

1、熟练掌握分光光度仪的规范化操作程序和注意事项；

2、掌握考马斯亮兰染色法定制牛血清蛋标准曲线的原理和操作注意事项；

3、对比双缩脲法、Folin法测定蛋白含量，分析，总结考马斯亮兰染色法测定蛋白含量的优、缺点。

实验原理

考马斯亮兰染色法定制牛血清蛋标准曲线的原理

实验操作

1、考马斯亮兰染色法定制牛血清蛋白标准曲线；

（1）准确配制100ug/ml牛血清蛋白标准溶液；

（2）按下表进行牛血清蛋白标准曲线加样操作；

（3）按下表进行标准曲线定制及样品测定加样操作及OD值测定；

（4）微机数据处理：确定回归方程，定制考马斯亮蓝染色法牛血清蛋白标准曲线。

表1  考马斯亮蓝染色法定制牛血清蛋白标准曲线及人体血清蛋白测定加样操作和OD值测定表

2、人体血清蛋白测定

（1）人体血清蛋白待测液配制：用0.15mol/L NaCl将人体血清蛋白稀释1000倍；

（2）人体血清蛋白待测液OD值测定：参见上述表格进行。

实验结果分析与数据处理：（注：当r≤0.9900时，需重点进行实验误差分析）

     计算人体血清蛋白待测液的显色浓度，再由此显色浓度，计算人体血清蛋白含量（mg / mL）

实验报告要求  按定量分析实验报告书写格式书写，加样表和数据处理表以及标准曲线用电脑处理后打印后与实验报告粘贴在一起。（注意打印报告单与实验报告的粘贴方式）。

思考题

1、请分析，总结考马斯亮蓝染色法测定蛋白含量的优缺点和操作注意事项？

2、请列表从实验原理、操作方法、标准品使用量、线性关系好坏比较微量凯氏定氮法、双缩脲法、Folin法、考马斯亮蓝染色法、紫外分光光度法测定蛋白质含量的优、缺点。

 

第二篇：考马斯亮兰蛋白

蛋白质的测定5%组织匀浆

0d对照

鳃鳃水管水管消化腺消化腺2d对照

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Cu

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Pb

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Cd

鳃鳃水管水管消化腺消化腺5d对照

鳃鳃水管水管消化腺OD值

Pro

10.6491.30935220.5570.91244830.5430.8520540.5670.9555950.6491.3093526

0.6941.50349

OD值Pro

10.5510.91341520.571.00218730.6391.32456840.6981.60022850.7331.76375560.7781.97400470.6861.54416280.6251.25915890.6811.520801100.6781.506784110.641.329241120.6611.427357130.5720.922798140.5570.866871150.6631.262089160.6671.277003170.731.511897180.7891.731877190.6541.228533200.5880.982454210.6841.340387220.5480.833315230.7451.56782524

0.7611.62748

注：7--12各数值均较大，有待考量OD值

Pro

10.5080.97784220.4990.88894730.5421.31366740.5361.2544045

0.555

1.44207

空白1空白2标准1标准2

空白1空白2标准1标准2

空白1空白2标准1标准2

空白1空白2标准1标准2

消化腺Cu

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Pb

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Cd

鳃鳃水管水管消化腺消化腺10d对照

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Cu

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Pb

鳃鳃水管水管消化腺消化腺Cd

鳃鳃水管水管消化腺消化腺60.58570.580.51790.589100.572110.6120.559130.621140.609150.72160.802170.771180.809190.576200.577210.798220.566230.787240.803OD值

10.60320.57730.64640.62550.6160.55770.57580.57390.672100.662110.698120.702130.588140.579150.642160.661170.671180.732190.597200.593210.636220.661230.77824

0.7361.7383860.8988251.0667371.7778951.6099821.8865441.4815790.7596940.7254861.0419061.2756581.1872891.2956130.6314150.6342661.2642560.6029091.2328991.278509

Pro

0.8203710.7274320.9740790.8990130.8453940.655940.7202830.7131331.0670191.0312731.1599591.1742570.7667520.7345810.9597811.0276981.0634441.2814950.7989240.7846250.9383331.0276981.4459271.295794

空白1空白2标准1标准2

空白1空白2标准1标准2

15d

对照鳃

鳃水管水管消化腺消化腺Cu鳃

鳃水管水管消化腺消化腺Pb鳃

鳃水管水管消化腺消化腺Cd鳃

鳃水管水管消化腺消化腺20d

对照鳃

鳃水管水管消化腺消化腺Cu鳃

鳃水管水管消化腺消化腺Pb鳃

鳃注：OD值已修改OD值Pro10.4950.67868520.4570.53215130.5851.0257440.5841.02188450.5330.82521960.5911.04887770.5270.80208280.5020.70567890.5760.991034100.6111.126110.621.160705120.6521.284103130.5380.8445140.5050.717247150.6291.195411160.5961.068158170.6091.118288180.7021.476911190.5740.983322200.5931.056589210.681.392075220.6581.30724230.6991.465342240.6851.411356注：OD值均减去0.004（由于比色皿染色）OD值Pro10.5970.74355420.5870.71072630.6630.96021940.6690.97991550.7441.22612560.7751.32789270.5960.74027180.6070.77638290.7041.094813100.7181.140773110.7731.321327120.7081.107945130.6160.805927140.6220.825624空白1空白2空白3空白4标准1空白1空白2标准1

水管

水管

消化腺

消化腺

鳃

鳃

水管

水管

消化腺

消化腺150.7571.268802160.7041.094813170.8051.426376180.7481.239257190.6590.947087200.6650.966784210.7181.140773220.6620.956936230.7891.373851240.8391.537991

OD值数据已修改

蛋白含量水平的变化，与匀浆的效果、Cd

均值

0.3390.3520.476

0.4760.34550.4760.3590.3520.485

0.4670.35550.4760.32

0.3290.483

0.4680.32450.47550.41

0.4080.467

0.4650.4090.466

0.3490.360.544

0.560.35450.5520.370.3770.533

0.5290.37350.531

0.316

0.322

0.394

0.402

0.4650.3190.3980.465

注：空3、空4暂时未用，计算出的结果偏大

0.366

0.375

0.5420.37050.542

浆的效果、取样组织的水分含量等因素有关，常常出现较大的

较大的波动性