生物化学实验理论考试题答案

1.        醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端，为什么？

答；电泳时点样端应靠近负极，因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。

2.        用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的作用,为什么？

答；空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。

3.        简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理？

答；血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。

4.        何谓Rf值？影响Rf值的因素？

答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关，对同一种物质来讲Rf是一个常量。

5.        什么是盐析？盐析会引起蛋白质的变性吗？一般用什么试剂?

答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性，因为蛋白质的结构并未发生改变，去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解；一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析

6.        简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？

答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计 测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。

7.        影响蛋白质沉淀的因素是什么？沉淀和变性有什么联系？

答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。沉淀时蛋白质可能仍然保持天然构像，而变性是蛋白质的高级结构被破坏失去活性。

8.        简述薄层层析法分离糖类的原理/?

答;薄层层析的实质就是吸附层析，也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的涌动速度不同达到分离的目的

9.        等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？

答;当溶液的PH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的PH值就是该蛋白质等电点。蛋白质在等电点时的溶解度最小。

10.    蛋白质显色黄色反应的原理是什么?反应结果为什么深浅不一？

答;含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质中所含的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一 。

11.    RNA水解后的三大组分是什么？怎样各自验证的？

答;核糖，磷酸，嘌呤碱。核糖+苔黒酚—Fe（浓HCI）绿色物质；磷酸+钼酸铵——蓝色；嘌呤碱+硝酸银——白色

12.    等电点时为什么蛋白质溶解度最低？

答;蛋白质形成胶体二等条件是带电荷，从而在外表面形成水化膜，导致各胶体颗粒不结合，当PH等于PI时，静电荷为零，蛋白质分子之间不存在排斥，则聚集沉淀，所以在等电点时溶解度最小。

13.    鸡蛋清可以用作铅汞中毒的解毒剂是为什么?

答;由于重金属离子能与蛋白质中带负电基团如—COOH等作用，生成难溶重金属的蛋白质盐，减少机体对重金属的吸收。

14.    血清醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条带？哪带电泳最快？影响电泳速度有哪些？

答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白点用最快。影响因素蛋白质所带电荷数，分子大小与形状以及缓冲液浓度。

15.    什么是抑制剂？什么是变性剂？区别是什么？

答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活变性的物质成为抑制剂；凡是能引起蛋白质变性失活的物质叫变性剂。抑制剂只是抑制蛋白质的特性而变性剂则破环蛋白质的结构。

16 简述橘皮中提取果胶原理？

答；果胶不溶于乙醇的原来将其沉淀得到果胶。

17 离心管如何在天平上平衡？操作离心时应注意什么?

答;把放在小烧杯中的离心管（包括盖子）和管套放在平衡的天平上，用胶头滴管取离心液调平。注意点：配平、等重的试管放在对称的位置；启动时要先盖好盖子，停止后才能开盖；有不正常的声音时应按STOP键,而不是POWER键；禁止把小而中的东西放在离心机上以防伤人。

 

第二篇：生物化学实验考试重点

1.何为离心技术？它有什么用处？

　离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。离心机转子高速旋转时，当悬浮颗粒密度大于周围介质密度时，颗粒离开轴心方向移动，发生沉降；如果颗粒密度低于周围介质的密度时，则颗粒朝向轴心方向移动而发生漂浮。

用处：它是分离细胞器和生物大分子物质基本的必备手段之一，它是测定某些纯品物质的部分性质的一种方法。

2.简述离心机的分类

（1）工业用：低速，高速，超速离心机

（2）试验用：1制备：a普通离心机：台式普通，台式超速离心机。B冷冻离心机：大容量，高速，超速冷冻离心机。2分析：分析超速离心机。

3.简述层析法的基本原理及分类

原理：所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。

分类;氧化铝柱，活性炭柱，纸上，液相，高效液相，硅胶薄层，聚酰胺薄层，离子交换，凝胶，亲和，金属螯合，疏水，共价层析

4.简述层析技术的一般过程，层析技术可运用在哪些方面？

过程：1层析柱的制作，2加样，3洗脱，4检测与鉴定

运用：1小分子有机物质的纸层析及薄层层析。2用吸附柱层析分离，纯化胡萝卜素。3用亲和层析法分离青豌豆凝集素。4凝胶过滤测蛋白质相对分子量。5用hplc分析维生素

5．分光光度发的基本原理。运用

　分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

运用：1蛋白质含量的测定2氨基酸含量的测定3糖类含量的测定4核酸含量的测定5酶活力测定6其他有色物质的测定

6简述测定谷物样品中赖氨酸含量的意义？

答：赖氨酸是碱性氨基酸（一羧基二氨基），它是人体不能合成的氨基酸，必须由食物提供，所以称为必需氨基酸。食物中必需氨基酸含量不高，营养价值就不高；且赖氨酸在人类主食谷物蛋白质中的含量最少（约为0.2%—0.4%），因此它成为营养品质的一个重要指标。故要测定谷物中赖氨酸含量。

7在实验过程中应注意那些事项？

答：移液要准确；定容时防止样品粘底；过滤时要干滤；移液要准确；加热时间要足。

8测定赖氨酸含量为什么用亮氨酸做标准曲线？

答：由于赖氨酸本身有2个NH₂，但它在蛋白质中，只有一个ε-NH₂可以测定，所以用C原子数与之相同而分子量比值为1.115的亮氨酸来做标准，进行比较。

9薄层层析基本原理是什么？它与纸层析有何不同？

薄层层析则是根据吸附层析和分配层析两原理将物质分开的；而纸层析主要是根据分配层析的原理进行的。

10 R_f值如何计算，意义是什么？

Rf值（比移值）=原点（样品）到层析中心距离除原点到溶剂前沿距离。

意义：

11 氨基酸的薄层层析中，固定相和流动相分别是什么？

固定相是水和硅胶G，流动相是有机溶剂。

12试验为什么要加无水乙醇（从蛋白质的结构上考虑）、KOH及碳酸铜？

答：加无水乙醇的原因:一是做溶剂，使蛋白质溶解出来；二是破坏蛋白质的空间结构使其次级键断裂，让肽键暴露出来，利于反应进行。加KOH的原因：提供强碱条件。加碳酸铜的原因：提供反应所需的Cu²⁺。

13实验中为什么要检验淀粉酶溶液，淀粉溶液或糖溶液?

14温度对酶活性有影响，说明酶具有什么性质？实验中如何观察？

为说明酶具有易变性。由于酶是蛋白质，所以易受温度影响，在高温下，酶变性而失去活性；低温下，酶的活性被抑制；适宜温度，酶的活性最强。实验中通过在冰水、40℃水浴和沸水浴中淀粉底物的消失情况进行观察，即冰水中，酶的活性被抑制，淀粉部分分解，遇碘（I₂）显紫红色；沸水浴中，酶变性而失活，淀粉不分解，遇I₂变兰色；40℃水浴，酶的活性最大，淀粉完全分解，遇碘不显色。

15 PH对淀粉酶活性有影响，其最适PH是多少？实验中如何判断？

淀粉酶的最适PH值是5。实验中通过PH为3、5、7检验淀粉酶的最适pH为5，即pH值为3时，酶的活性丧失，淀粉不分解，遇碘（I₂）显蓝色；pH值为5时，酶的活性最大，淀粉完全分解，遇碘不显色；PH值为7时，酶的活性被部分抑制，部分淀粉已分解，遇碘显紫红色。

16本实验如何检验淀粉酶的专一性.

17简述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶的原理？

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶的原理——溶质在电泳的作用下，利用凝胶电泳的浓缩效应，将被分离物质缩成一狭窄区带，在具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶中移动，通过凝胶电泳的电荷效应和分子筛效应，而将不同同工酶分离。

18电泳中加溴酚蓝、制胶中加过硫酸铵、加样后加蔗糖的作用是什么？

19、简述聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程步骤及注意事项？

20植物组织中的可溶性糖包括哪些？溶于冷水的有哪些？

植物组织中的可溶性糖包括所有的单糖、寡糖和部分溶于热水的多糖（淀粉和果胶）；溶于冷水的有所有的单糖和寡糖。

21总结分光光度法测定可溶性糖的一般操作程序及注意事项。

22  RNA和DNA的组成成分有何异同，能否用鉴定用RNA成分的方法鉴定DNA的成分?

答：不能。因为RNA和DNA中的核糖不同，但磷酸和嘌呤可以用此法。

23提取RNA时加乙醇的作用什么？

（起沉淀作用）{加乙醚的作用是除去水分}

24离心操作应注意那些问题？（看教材P13的第5点和P185的第六）

（1）盛量液为离心管的2/3；

（2）离心前需平衡（在离心管和外套之间加水）；

（3）对称放入离心机两边；

（4）离心时逐渐加速；

（5）有特殊响声时立即关机。

25前5min放氧量与后5min放氧量有差异，说明什么问题？用所学理论进行解释。

说明：前5min放氧量大于后5min放氧量。这是因为，在酶含量不变的情况下，放氧量与底物浓度呈正相关；前5分钟的底物浓度大于后5分钟的底物浓度，反应所释放的氧量大于后5分钟。

26 影响过氧化氢酶活性测定的因素有那些？

     提取酶液时速度要快，提取出来不及时用需冷藏；仪器安装及准备是要细心，注意漏气；测定时要快速，认真等。

27简述紫外分光光度法测定硝酸盐含量的原理？

28紫外分光光度法和可见分光光度法在测定物质含量时有何不同？

最大的不同点：一是紫外分光光度法要脱色，而可见分光光度法要显色；

二是紫外分光光度法要用石英比色皿比色，而可见分光光度法用玻璃比色皿比色。

（因为紫外光不能透过玻璃）

29如提取液有色，能否测定出硝酸盐含量？

不能。

30．结合试验，总结分光光度法测定物质含量的一般操作过程和注意事项

过程：1配制标准溶液，制作标准曲线2样品准备和提取3测定4计算

注意事项：（1） 使用过程中比色皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比色皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面。比色皿应该避免磨损透光面。

（2） 使用过程中不得打开盖子，保持仪器清洁,为避免溶液洒落对仪器造成的腐蚀，所有溶液的配置、倾倒都不要在仪器附近操作。比色皿放进样品池之前必须把外表面擦干。

（3）当（仅当）操作者错误操作或其他干扰引起微机错误时，应该立即关断主机电源，重新启动，但无须关断灯源电源。

（4）光学器件和仪器运行环境需保护清洁。清洁仪器外表时 ,请勿使用乙醇乙醚等

有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩。

31．什么叫电永？简述电泳的基本原理。

电泳：带电粒子在直流电场中向着 所带电性相反的电极移动的现象。

电泳的原理：电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

32．什么叫迁移率？电场强度，ph，温度对迁移率有何影响？

迁移率：迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度

影响：电场：在一定大小的电场中，带电颗粒的涌动受所用电压的控制，电压越高，带电颗粒涌动越快，同一带电粒子在不同电场中涌动速度不同。

Ph：ph值决定带电粒子的解离程度。

温度：电泳过程中由于通电引起温度升高，致使介质粘度下降，颗粒运动加剧，引起自由扩散，迁移率增加。

33．凝胶电泳技术可运用在哪些方面?

1利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶，2sds-page测定蛋白质相对分子量3利用聚丙烯酰胺凝胶测蛋白质等电点4高压peag分离dna片段