某个人接触化工设计的一点心得

搞化工工艺设计的，不是高手哈，但希望自己一点体会能与大家分享，希望能对刚刚进入这个行业的新人有一点帮助起初或许每个人都会感觉到无处下手，这是真的哦，看到在论坛中大家提到的那么多的规范手册了吧，这些都是基础哈，不可能一时都有时间和精力去看去学的，我师傅相当的有现场和设计的经验，哈哈他指导我呀，我很快就要上手了，下面讲讲

1， 最重要的是多看 化工工艺设计手册，新手来说这是个非常全面的设计手册了，集工艺计算和设计一体，起初我也是略读了一遍的，哈哈，耐着极大的耐心的

2， 在设计过程中多翻设计手册，当然最基本的 《化工工艺设计施工图内容和深度统一规定》（HG/T20519-92）也要慢慢的深入到设计工作中了，因为参加项目设计时这些东西都会潜移默化的用到

3， 多向自己问问为什么！！注意了，是向自己问哦，而不是把很基础很白吃的东西还去问师傅或其他的人，希望这点很多新人谨记！如果有些问题自己问了自己，可以找些手册亚什么的先了解下，比较难没有方向的话到可以问问师傅，问关于什么方面的介绍和规定呀在哪可以找到亚之类的，每个师傅都喜欢一个好学的徒弟，而不是一个意味死板白吃的徒弟！如果说你的师傅说很喜欢你问问题的话，要多想想哦，（曾学过心理学还算能体会哈）

4，一定要熟练的迅速掌握公司的专用软件哈，当然办公软件做设计肯定要熟练了，其他的看公司情况了，autocad，pds&pdms，proII.....不一样的吧， 尽快上手，这是关键，不然就是有机会让你上，你也会因此不熟练而失之交臂，工具往往是利器！

4， 注重要看的手册慢慢要加起来了，当然配管的话就要多翻 化工管路手册了，如果有消防的话就要看 化工消防设计规范 ，其他的比较少接触哈，不好意思，不过lz 列出的手册堪称是重重之用了，本人也要多学了哈，不过在设计过程中师傅会提醒你参阅设计相关的手册亚规定的什么的吧，所以不要担心那么多哈，把最基本的 化工工艺设计手册 翻烂就很专业啦

5，

6， 多上专业论坛学习充电哈，海川真的不错哦ps几点：

7， 保持一颗对工作负责的心，搞化工设计，时刻要有 ‘十分’ 的责任感！刚开始肯定要经常加班加点，这是你进入设计行业的必通之路，要有责任就要掌握尽可能多的东西来保证哈

8，多交流哈，化工工艺在化工设计中可是龙头专业，需要和许多的专业打交道和传递信息，学会多听人家专业的说法，不要凭直觉判断专业问题！

9，多帮助周边的人，每个人都有自己的专长，要发挥自己特长主动帮助需要帮助的人呀，良好的工作氛围是良好的工作的保证

10，对工作少说不，机遇和挑战并存的态度对待工作，要耐得住性子，干这一行，实话说经

验相当重要，已经深有体会了，看着有着丰富经验的老些的师傅真是尤心得羡慕崇拜 新人们我们一起努力哈，不要抱怨什么，要的是行动哈

 

第二篇：引物设计个人心得

Primer 5.0搜索引物：

1.Primer Length我常设置在18－30bp,短了特异性不好，长了没有必要。当然有特殊要求的除外，如加个酶切位点什么的。

2.PCR Product size最好是100－500bp之间，小于100bp的PCR产物琼脂糖凝胶电泳出来，条带很模糊，不好看。至于上限倒也不必要求苛刻。

3.Search parameters还是选Manual吧，Search stringency应选High，GC含量一般是40－60％。其它参数默认就可以了。

4.搜索出来的引物，按Rating排序，逐个送Oligo软件里评估。当然，搜索出的引物，其扩增产物很短，你可以不选择它，或是引物3端≥2个A或T,或引物内部连续的G或C太多,或引物3端≥2个G或C，这样的引物应作为次选，没得选了就选它。对于这样的引物，如果其它各项指标还可以，我喜欢在引物末端去掉一个不满意的或加上一个碱基，看看引物的评估参数有没有变好点。

Oligo 6.0评估引物：

1.在analyze里,Duplex Formation不管是上游引物、下游引物还是上下游引物之间，The most stable 3’-Dimer绝对值应小于4.5kcal/mol, The most stable Dimer overall绝对值一般应小于多少kcal/mol跟PCR退火温度有关，我几次实验感觉在PCR退火温度在65°的时候，The most stable Dimer overall 6.7kcal/mol没有问题。

2.Hairpin Formation根据黄金法则

3.False priming sites: Primer的priming efficiency应该是错配地方的4倍左右，更多当然更好。

4.在PCR栏，个人感觉其所显示的optimal annealing temperature数值值得参考。在PCR摸索条件的时候，退火温度为其数值加减2的范围就可以了。

5.Internal stability很重要：我们希望引物的内部稳定性是中间高、两边低的弧形，最起码保证3端不要过于稳定。 下图1引物3端过于稳定，很容易导致不适当扩增。△G参照黄金法则，这其实很好理解：把一滴水放到大海里，这滴水就会不停的扩散分布，扩散的越厉害越稳定，所以△G绝对值越大结构越稳定。 PCR引物设计的11条黄金法则

1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。

DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。

2.引物长度一般在15~30碱基之间。

引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。

3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。

GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估计引物

的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。

4.引物3′端要避开密码子的第3位。

如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。

5.引物3′端不能选择A，最好选择T。

引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。

6. 碱基要随机分布。

引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。

7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。

引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。

两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Cross dimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过高（应小于

4.5kcal/mol）。否则易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行。

8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低。

△G值是指DNA 双链形成所需的自由能，它反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性，△G值越大，则双链越稳定。应当选用5′ 端和中间△G值相对较高，而3′ 端△G值较低（绝对值不超过9）的引物。引物3′ 端的△G 值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应。（不同位置的△G值可以用Oligo 6软件进行分析）

9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。

引物的5′ 端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′ 端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。

引物的延伸是从3′ 端开始的，不能进行任何修饰。3′ 端也不能有形成任何二级结构可能。

10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。

某些引物无效的主要原因是扩增产物单链二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关软件（比如RNAstructure）可以预测估计mRNA的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G°）小于58.6l kJ/mol时，扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时，用7-deaza-2′-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是有帮助的。

11. 引物应具有特异性。

引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。

值得一提的是，各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难，例如GC含量偏高或偏低，导致找不到各种指标都十分合适的引物；用作克隆目的的PCR，因为产物序列相对固定，引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次，尽量去满足条件。

做Real Time时,用于SYBR Green I法时的一对引物与一般PCR的引物,在引物设计上所要求的参数是不同的。引物设计的要求：

1)避免重复碱基，尤其是G.

2)Tm=58-60度。

3）GC=30-80%.

4)3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C.

5)正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。

6)PCR扩增产物长度： 引物的产物大小不要太大，一般在80-250bp之间都可；80～150 bp最为合适（可以延长至300 bp）。

7)引物的退火温度要高，一般要在60度以上；

要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。

而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力，即引物应该跨外显子，最好是引物能跨外显子的接头区，这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。

至于设计软件，PRIMER3,PRIMER5,PRIMER EXPRESS都应该可以的。

做染料法最关键的就是寻找到合适的引物和做污染的预防工作。对于引物，你要有从一大堆引物中挑出一两个能用的引物的思想准备---寻找合适的引物非常不容易。

关于BLAST的作用应该是通过比对，发现你所设计的这个引物，在已经发现并在GENEBANK中公开的不物种基因序列当中，除了和你的目标基因之外，还有没有和其他物种或其他序列当中存在相同的序列，如和你的目标序列之外的序列相同的序列，则可能扩出其他序列的产物，那么这个引物的特异性就很差，从而不能用。

其实做起来全靠经验 我就一直用oligo 黄金法则也不是一定要遵守的