实验三 细胞膜的渗透性实验

一、实验目的

1. 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

2. 掌握估测、比较各类物质进入细胞速度的方法。

二、实验原理

将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶质渗入速度不相同，因此溶血时间也不相同。因此，溶血现象可以可用于粗略判定物质穿膜的速度快慢和时间。

影响物质穿膜能力大小的因素主要有三个：一是物质脂溶性的大小，因为膜骨架是有脂双层分子构成的，所以脂溶性物质易于穿过细胞膜；二是分子体积大小，较小的分子易穿过细胞膜；三是物质带电状况，因为细胞表面一般带电，不带电的物质易进入细胞。

判定细胞溶血不溶血的方法：溶血的溶液红的程度更高，且溶液发亮，透明度也更高。二是可以在显微镜下观察细胞的形态。细胞破裂后细胞形态并没有发生很大的变化，而是膜结构上有一个小口，膜还是有结构的，只不过体积变小了。

需要说明的等渗溶液中细胞也会是破裂的，因为生活状态下膜两侧不断交换物质，代谢产物的积累使细胞渗透压的平衡破坏，同时有些代谢物质对细胞是有毒性的，所以长时间放置会使细胞破裂，所以做等渗实验时间不宜超过1h。

三、实验材料

试剂：鸡血，0.85%氯化钠溶液，0.0085%氯化钠溶液，0.8mol/L甲醇，0.8mol/L丙三醇，6%葡萄糖溶液，2%Triton X-100

用具：显微镜、粗天平、载破片、盖玻片、滴管2支、离心管2支、离心机、9试管、磁力搅拌器。

四、实验步骤

1、 取鸡血2-3ml，加0.85%氯化钠溶液4ml，在1000r/min条件下离心5min（RBC压积量应不少于0.3ml，否则应补加鸡血）

2、 将上述离心的红细胞按沉淀量配成50%浓度，总体积量应不少于0.6ml

3、 每组取6支试管分别加入如下溶液各3ml

（1）0.85%氯化钠溶液

（2）0.0085%氯化钠溶液

（3）0.8mol/L甲醇

（4）0.8mol/L丙三醇

（5）6%葡萄糖溶液

（6）2%Triton X-100

4、向上述6试管中分别加入50%红细胞悬液1滴，用吸管吸打均匀。观察各管是否有溶血现象发生（观察时间一小时）。记录溶血时间并于显微镜下观察各溶液中细胞。

五、实验结果

1.实验结果记录表

表一 不同低渗溶液下的溶血现象

2．实验结果图

图一 肉眼观察六种溶液中鸡红细胞溶血状况

结论：①—⑥为试管编号，从左至右为溶血程度由小至大。

1 号试管为：3ml0.85%氯化钠溶液+1滴稀释鸡血 不溶血

2 号试管为：3ml0.0085%氯化钠溶液+1滴稀释鸡血 溶血

3 号试管为：3ml0.8mol/L甲醇+1滴稀释鸡血 溶血

4 号试管为：3ml0.8mol/L丙三醇+1滴稀释鸡血 半溶

5 号试管为：3ml6%葡萄糖溶液+1滴稀释鸡血 半溶

6 号试管为：3ml2%Triton X-100+1滴稀释鸡血 溶血

六、实验分析及结论

1. 离心机使用时,要将配平后的离心管对称放置在离心机内,禁止未配平就放入离心机和非对称放置离心管。

2. 试管中有红细胞和测试溶液时,不应强力摇晃,以免造成人为的红细胞破裂。

3.对于溶血较快的试管，用显微镜观察时要注意滴加血液后立即镜检，否则将会因为细胞溶血太快而看不到细胞。

4.即使细胞在等渗溶液中短时间内未发生溶血现象，但是细胞长时间处于等渗溶液中也会发生溶血现象。

5.发生溶血的细胞从形态上看，膜结构上有一个个口，膜还是有结构的，但是细胞比正常细胞小。

6.由于甲醇等溶液中细胞溶血发生过快，未能在显微镜下观察到。