经小鼠初步毒理学实验确定致死量LD，得出LD₀ =1000mg/kg，LD₁₀₀ =10000mg/kg。在整个实验期间，雌、雄性小鼠分笼饲喂，定时饲喂标准全营养复合饲料，饲养室温度控制在15-30℃，相对湿度为60-85%，小鼠可自由采食并饮水自由。

将40只小鼠雌雄分类随机分为5组。利用改良寇氏法[26,27]设计4组剂量组，剂量的设置依据预实验得出的100%致死量LD₁₀₀为最高值，按照组距等比递增计算得出（见表1）。

表1  实验分组给药及检测血样情况

分组 小鼠个数(只)  性别    检测血样数   给药肌注剂量（mg/kg）  剂量组分类

 1      10         雄性         5           1000              最低剂量组

 2      10         雄性         5           2137              低剂量组

 3      5          雌性         5           4570              高剂量组

 4      5          雌性         5           9772              最高剂量组

 5      10         雌性         5            0                 空白对照组                                       

随机选取10只小鼠,雌雄各半，提取其血液样本。其血液的白细胞数目（WBC）、红细胞数目（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板数目（PLT）项目，相关数据如表1所示。本项研究的小鼠HGB、RBC、WBC及PLT项目检测数据正常值参考范围分别为110-143(g/L)、6.36-9.42(1012/L)、0.8-6.8(109/L)、450-1593(109/L)。将表2数据与其相对比可知，实验前各小鼠血液指标均为正常值，且其外在活动也均表现正常。

表2  饲药前雌雄两组10份小鼠血液样本WBC、RBC、HGB、PLT检测结果

    序号         WBC            RBC          HGB         PLT

         1          4.10               7.70        129.00         816.00  

         2          4.50               7.53        125.00         898.00

         3          5.50               7.68        137.00         702.00

         4          5.40               8.42           140.00         833.00  

         5          3.20               7.28            136.00         825.00  

         6          4.60               6.80        136.00         788.00  

         7          4.70               6.55        128.00         653.00  

         8          5.30               7.65        139.00         850.00  

         9          6.50            7.51        118.00         753.00  

        10          5.40            6.82              127.00         825.00  

表3是根据实验分组给药的检测血样结果，其中第2组只抽检到4份血样。

表3  饲药后5组24份小鼠血液样本WBC、RBC、HGB、PLT检测结果

编组    序号        WBC          RBC          HGB         PLT

   1        1          4.20          7.58        115.00         404.00  

   1        2          4.30          4.78        64.00           489.00

   1        3          7.60          7.84        115.00         261.00

   1        4          7.20         10.59           161.00        1169.00  

   1        5         11.70         9.21            130.00         852.00  

   2        6         12.10         9.85        141.00         833.00  

   2        7          4.90          6.32         95.00         155.00  

   2        8         13.70         9.54        141.00         960.00  

   2 ^a       9          9.60         7.44        110.00         662.00  

   3       10          7.86         9.84              138.00        1302.00  

   3       11          8.80         8.71        133.00        1361.00  

   3       12          5.80         8.90        138.00        1040.00  

   3       13          7.80         9.23        138.00         931.00  

   3       14          7.90         10.05            141.00        1218.00

   4       15         17.60          8.60             125.00        1129.00  

   4       16          6.40          6.58             103.00         831.00  

   4       17         10.80          8.92             128.00        1414.00  

   4       18         25.30          8.72             124.00         595.00

   4       19         11.60          8.50             117.00        1189.00

   5       20          7.80          8.59             124.00        1001.00  

   5       21          9.70         10.52            165.00        1620.00  

   5       22         15.70         10.38         158.00         1173.00  

   5       23          7.00         10.08          149.00        1083.00  

   5       24          6.80          9.52          136.00        1317.00

一、单因素分析

用SPSS Statistics 23对5个实验组进行单因素分析，看给药剂量对四个指标是否有显著性影响。

操作步骤：

1、导入数据

2、工具栏，分析->比较平均值->单因素ANOVA检验

3、选择自变量和因变量

4、点击事后比较，设置如下

5、点击继续返回，点击选项，设置如下

 

6、点击继续，点击确定，得出输出结果。

 

输出结果分析

 

由标准差可见，4个指标的组间离散情况是PLT>HGB>WBC>RBC。

 

只有HGB的显著性小于0.05，方差不齐性，其他的显著性均大于0.05，说明方差齐性。

样本组间自由度为4，组内自由度为19，查F值界值表可知F表=3.56

4个指标只有PLT的F值>F表，且sig<0.05，说明PLT与剂量大小存在显著性差异。

二、回归分析

将对剂量有显著性差异的PLT做回归分析

操作步骤：

1、 导入数据

 

2、 工具栏点击分析->回归->曲线估算，设置如下，进行线性、二次和三次回归分析探索比较分析。

 

3、 点击确定，得到输出结果，对比发现三次回归的R方最大，残差最小，故建议采用三次方拟合曲线做回归分析，回归方程为PLT=-1.598E-8*剂量³-0.708*剂量+1209.882。

 

 

第二篇：中药药理学实验

实验一 附子炮制前后致小鼠中毒死亡的情况比较

实验目的：用小鼠死亡数观察附子炮制前后毒性的不同

实验原理： 附子的有毒成份主要是乌头碱。它的性质不稳定，经长时间用水浸泡和加热煎煮炮制，都可使乌头碱水解成毒性较小的苯甲酰乌头胺和乌头胺。生附子中乌头碱含量高，经过炮制后乌头碱含量减少，毒性也降低，引起动物中毒死亡的剂量就比生附子大得多。 

实验器材：小鼠笼（或罐）、电子天平、注射器（1ml），小鼠灌胃针头。
药品：生附子和熟附子水煎液1g/1ml、苦味酸。

材料：小白鼠。体重18-22g，雌雄不拘。 

实验方法
1，取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生附子和炮制后的附子水煎液灌胃。30min后观察两组小鼠中毒症状和死亡数有无不同。

2，生附子灌服后约20min动物出现腹部收缩，身体摇摆，步态不稳和不安静等现象；30min左右可能死亡。而炮制附子水煎液灌服后则无此中毒现象。观察结果并记录。

实验结果：

思考题：

1.  中药炮制后对临床有何指导意义

2.  为预防附子中毒，应如何降低其毒性

延胡索炮制前后镇痛作用的影响

实验目的：通过醋酸扭体法观察延胡索炮制前后镇痛作用的变化

实验原理：延胡索的醇制浸膏、醋制浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。延胡索乙素镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。延胡索乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛作用较吗啡弱但优于复方阿司匹林，对钝痛的作用优于锐痛。与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用少而安全，没有成瘾性。镇痛时对呼吸没有明显抑制，也无便秘等副作用。生品中游离生物碱难溶于水，煎液中有效成分低，醋制后生物碱成盐，易溶于水，镇痛作用增强。

 左旋四氢巴马汀是一个多巴胺受体阻断剂，其镇痛作用机制可能与阻断脑内多巴胺D1

受体，使纹状体亮氨酸脑啡肽含量增加有关。

实验方法：

 取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生延胡索和

炮制后的延胡索水煎液灌胃。45分钟后分别腹腔注射0.7％冰醋酸溶液。15min后观察小鼠们15分钟内扭体的次数。

实验结果：

思考题：

1.  炮制后延胡索镇痛作用增强的原因

实验二：生大黄制大黄对小肠运动的影响

实验目的：观察泻下药大黄、制大黄对小白鼠肠蠕动的影响以及它们的药理研究。

实验原理：大黄的主要成分为蒽醌衍生物及二蒽酮类衍生物，大黄为泻下药的代表，临床发现病人大量服用大黄后会产生继发性便秘，在中医治疗中，常以芒硝、厚朴、枳实等配伍应用，以减轻此副作用  。现代研究表明，是因为大黄同时含有泻下作用的蒽苷及止泻作用的鞣质所致，蒽苷泻下作用强而作用时间较短，鞣质止泻作用强度较弱而作用时间长，大黄不同炮制品的致泻强度亦不同，生大黄的致泻强度高于熟大黄（九蒸九晒品、热压一次品及热压三次品）和制大黄酒（或醋）炒后泻下效力降低30%左右。有研究表明，大黄煎煮时间越长，致泻作用愈小，以热水浸50℃以下减压浓缩为好。

实验步骤：取体重20±2g相近的小白鼠8只，随机均分为2组，每组4只，用苦味酸做标记。分别用上述3种炭末液0.2ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，切开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲肠的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为“小肠总长度”，从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在肠内推进距离”，取各组小鼠平均值，用公式计算炭末推进百分率。 

          炭末推进率=炭末在肠内推进距离（cm）÷小肠全长（cm）×100%

实验结果：

思考题：1.大黄泻下的主要成分及机制

        2.大黄炮制前后化学成分有何变化

实验三：猪苓泽泻对家兔的利尿作用

实验目的：学校导尿法，观察猪苓泽泻的利尿作用

实验原理：猪苓味甘、淡、性平，归肾、膀胱经，具有利尿渗湿作用,且作用于黄芪、玉米须、木通、淡竹叶等。主治小便不利、水肿、泄泻、淋浊、带下。实验研究表明猪苓的利尿作用与抑制肾小管对水、电解质的重吸收有关,但其利尿特点及分子生物学机制尚不明确。 研究发现，其为利尿药，也有降血压的作用，可医治肾性水肿、心脏性水肿、烦热口渴、小便不利、泻痢及其他新陈代谢障碍等。猪苓提取物对肾结石大鼠实验表明: 猪苓具有明显促进肾排泄Na+、k+、cl-,而抑制尿ca+排泄及抑制尿草酸钙结晶的生长与聚集作用，同时其肾脏骨桥蛋白(OPN) mRNA的表达也得到抑制，表现出明显的利尿和抑制尿结石形成作用，并具有明显的肾功能保护作用。研究发现，猪苓含钾量不高(30mg) ，亦不稀释血液，其利尿作用可能是由于抑制了肾小管对电解质和水的重吸收。

泽泻性寒,味甘、淡，归肾、膀胱经。具有利水渗湿、泄热之功效。用于小便不利、水肿胀满、泄泻、尿少、痰饮、眩晕、热淋涩痛等症。泽泻有明显的利尿作用,这与其含有大量的钾盐有关。泽泻可用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高脂血症、泽泻含三萜类化合物及甾醇、生物碱、苷类、黄酮、有机酸、氨基酸、多糖、挥发油等成分。研究发现，泽泻对人及家兔均有利尿作用，可使健康人尿量增加63%，尿中排钠、尿素量也增加，而泽泻经甲醇、苯和丙酮提取的组分T 10mg/kg给药可使猫和兔的血压下降。

实验步骤：取一只家兔称重,固定，耳缘静脉注射生理盐水10ml/kg,固定在手术台上，插导尿管，排空膀胱内尿液，收集5～10min内尿液两次，一只家兔灌胃猪苓泽泻水煎液，另一只灌胃等量的生理盐水，30min后收集30min的尿液。

实验结果：

思考题：

1.  影响中药利尿的因素有哪些？

2.  猪苓利尿作用机制

3.  泽泻利尿作用机制

实验四 三七对小鼠出血时间和凝血时间的影响

实验目的：学习玻片法测定出血时间及凝血时间的测定，观察三七缩短出血时间的作用

实验原理：三七具有良好的止血功效，能明显缩短出血和凝血时间。 研究表明，三七的止血成分主要为三七素（Dencichine）。三七素能促使血小板聚集、变形，释放ADP、血小板因子Ⅲ和钙离子等物质而达到止血作用。三七中含有的三七皂苷与人参皂苷均对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显抑制作用，且表现出剂量——反应模式。在同等剂量下三七总皂苷与人参总皂苷的作用没有明显差转自http://www.foryn.cn异。三七皂苷表现出对血浆凝血因子与血小板聚集性均有抑制作用。且在对血小板聚集的抑制方面，三七皂苷与人参皂苷的作用相当。人参三醇型皂苷具有溶血作用，人参二醇型皂苷的溶血活性很低。因此，三七具有活血化瘀的功效！ 

实验步骤：取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的三七和等量的生理盐水灌胃。30min后剪去小鼠尾端尾巴3mm左右，每隔30秒用滤纸轻轻吸除尾巴上的血，直至血流自然停止。然后45min左右，眼球取血滴于再玻片上两滴。计时，每隔30秒用针头轻佻，直至有血丝出现，马上挑另一只予以验证。即为凝血时间。

实验结果：

思考题：

1.  三七及三七伤药片对凝血时间有何影响，此作用临床意义何在？

2.  测定凝血时间有何临床意义？

实验五 桔梗对小鼠的祛痰作用

实验目的：学习酚红从呼吸道分泌法，观察桔梗对小鼠的祛痰作用

实验原理：指示剂酚红自小鼠腹腔注射并经腹腔吸收后，可部分地由支气管黏液腺分泌入气道，有祛痰作用的药物在使支气管分泌液增加的同时，其由呼吸道粘膜排出的酚红也随之增多。因而可从药物对气管内酚红排泌量的影响来观察其祛痰作用。酚红在碱性溶液中呈红色，将气管放入定量的生理盐水中，加碳酸氢钠使其显色，用比色法，分光光度计，测出酚红的排泌量。从而得到药物的祛痰作用。

实验步骤：取小鼠 4 只，随机分为对照组和桔梗水煎液组，按 20ml/kg，体重，灌胃给药 30min 后。对照组给同体积生理盐水。由腹腔注射酚红溶液0.5ml/只。30min 后颈椎脱臼处死小鼠，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进盛有 3ml 生理盐水的试管中，再加入 0.1ml 碳酸氢钠溶液。比较生理盐水组和桔梗组的液体颜色。

实验结果：

思考题：

1.桔梗祛痰作用的机制？

实验六 人参对小鼠游泳时间的影响

实验目的：了解人参对小鼠游泳时间的影响，掌握疲劳作用药物的常用筛选方法

实验原理：人参能促进人体对糖原和三磷酸腺苷等能量物质的合理利用，并使剧烈运动时产生的乳酸转化为丙酮酸进入三羧酸循环，为机体提供更多的能量，减轻体力运动时的疲劳。本实验以小鼠游泳时间为指标观察人参的抗疲劳作用。

实验步骤：玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持在20±0.5℃。取4只小鼠，雌雄不限，称重，用苦味酸标记，随机分为两组。给药组每只灌胃人参水煎液0.25ml/10g，对照组每只灌胃等容量的生理盐水，给药后30min分别放入玻璃缸内游泳，立即计时并注意观察，当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面者即为体力耗竭，停止计时，记录小鼠游泳时间。与对照组比较并进行统计学处理。分别算出两组的平均游泳时间实验结果：

思考题：

1.为什么人参可以抗疲劳？

2.影响小鼠游泳时间的因素有哪些？