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结核杆菌感染 T细胞斑点试验对老年不典型肺结核的诊断价值

作者：李晓红 胡海燕 李鹏武

来源：《中国实用医药》20xx年第01期

【摘要】 目的 探讨结核感染 T细胞斑点试验 （T SPOT -TB）对老年不典型肺结核的诊断意义。方法 选择 87例老年不典型肺结核患者以及同期住院的排除结核病诊断的 29例老年患者 ， 分别取外周血进行 T SPOT-TB检测及血结核抗体检测 ，实验结果进行比较。结果 对于老年患者取外周血进行 T SPOT?TB试验 ， 结核病组阳性率 59.77%， 对照组阳性率 13.79%， 经统计学分析差异有统计学意义 （ P0.05）。结核病组 T SPOT-TB与血结核抗体阳性率比较 ， 经统计学比较差异无统计学意义 （ P>0.05）；但对照组 TSPOT-TB与血结核抗体阳性率经统计学比较差异有统计学意义 （ P

【关键词】 结核杆菌感染 T细胞斑点试验；老年肺结核；诊断

 

第二篇：结核

三、结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)的主要应用 1、“菌阴”结核病患者的辅助诊断 对

于涂片和培养阴性的疑似结核病患者，提供一项可靠的实验室检测指标。 2、肺外结核的

鉴别诊断 结脑（儿童）、骨结核、肠结核（IBD患者）、结核性胸膜/腹膜炎（胸

一、背景 结核病是由结核杆菌（MTB）感染引起的慢性传染病。我国是世界上22个结核

病高负担国家之一，我国三分之一左右的人口已感染了结核杆菌，受感染人数约5.5亿。2000

年第四次全国结核病流行病学调查结果估计，我国现有肺结核病人约500万，主要集中在

25岁及以上人群；其中痰菌阳性的结核患者约有200万人，涂阳肺结核病人150万；每年

约有13万人死于结核病，死亡平均年龄为55.2岁。 据研究，受结核菌感染的人群中，10％

的人会发展为结核病。如果不采取有效的控制措施，在未来的10年，我国可能有近5000

万的感染者发生结核病。 解放后人们的生活水平不断提高，结核已基本控制，随着环境

污染和艾滋病的传播、吸毒、免疫抑制剂的使用，酗酒与贫困，难民迁移等诸多因素的影响，

结核及其它分枝杆菌所致的感染发病率又呈上升趋势。如何能够快速、准确的诊断结核病，

有效的控制结核病的继续蔓延，已经成为我们迫切需要解决的问题？然而，目前结核诊断的

标准仍局限于临床检查结核细菌培养和涂片直接镜检再辅以X线检查和结核菌素皮肤测试

观察。这些方法均依赖于病人的临床症状，不能达到早期检测潜在结核感染的目的。 结核

感染T细胞试验用于结核感染的检测和结核病的辅助诊断具在独特优势： 结核感染T细

胞检测(T-SPOT.TB) 上海迪安医学检验所 Page 5 of 15 （1） 具有非常高的灵敏度和特异性 （2） 不受环境分枝杆菌感染和卡介苗

（BCG）接种影响 （3） 基本不受机体免疫抑制剂影响，适用于HIV感染和免疫 抑制剂

治疗人群 （4） 简单的实验室血液或胸/腹水检查 （5） 24小时的快速报告结果 三步简

易操作： 抗凝外周血梯度离心，分离收集白细胞； 计数白细胞加入培养板，同时加入结

核特异多肽抗原； 37摄氏度培养过夜，计数T细胞斑点。 阳性结果表示样本含有结核特

异的效应T淋巴细胞，提示患者存在结核感染。阴性结果表示可以排除结核感染的可能。

二、产品的检测原理和方法 结核感染T细胞检测使用英国0xford Immunotec公司生产的

试剂盒，应用酶联免疫斑点技术（ELISPOT），产品的检测原理和检测方法如下。 2.1 产

品的检测原理 结核感染T细胞检测是利用结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核

特异的效应T淋巴细胞，这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌INF-γ而设计

的T细胞免疫斑点试验。 外周血单个核细胞，结核特异的混合抗原A和混合抗原B， 结

核感染T细胞检测(T-SPOT.TB) 上海迪安医学检验所 Page 6 of 15 对照试剂一起加入预先包被抗γ干扰素抗体的微孔培养板进行培养。当外周血

单核细胞中存在针对结核杆菌的效应T淋巴细胞时，培养液中加入的结核杆菌特异混合抗

原多肽A和B将刺激这些效应T淋巴细胞分泌γ干扰素。 分泌的γ干扰素被微孔板上的

抗体捕获，再次加入的碱性磷酸酶标记并针对γ干扰素不同表位的抗体与被捕获的γ干扰素

结合，滞留在微孔板表面。显色底物溶液在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀斑点。每

一个斑点代表一个γ干扰素分泌细胞（结核特异的效应T淋巴细胞）。通过对斑点进行计数

可以推测受试者体内是否存在针对结核杆菌反应的效应T细胞，从而对结核杆菌感染进行

辅助诊断。 这类反应统称为γ干扰素释放试验（γ Interferon Release Assay, IGRA），目前

已经列入美国、欧洲等地结核病诊疗指南，用于结核病辅助诊断。

临床肺科杂志20xx年9月第17卷第9期

结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值

陶臻 曾娟

【摘要】目的 探讨结核感染T细胞斑点试验（T- SPOT．TB）在结核病诊断中的应用价值。方法248例疑似结核患者采 用T-SPOT．TB试验和结核菌素试验（TST），比较两者对结核诊断的灵敏性、特异性、假阳性率和假阴性率。结果T-SPOT．TB 试验的灵敏性和特异性明显高于TST试验（P＜0.05）；T-SPOT．TB试验的假阳性率和假阴性率明显低于TST试验（P＜0.05）。结论 T-SPOT．TB具有更高的灵敏性和特异性，是结核筛检的有效试验方法。 【关键词】结核；结核感染T细胞斑点试验；结核菌素试验 TheapplicationvalueofT-SPOT．TBindiagnosisofTB TAOZhen，ZENGJuanNanjingFirstHospitalofNan- jingMedicalUniversity，Nanjing210006，China

【Abstract】Objective ToinvestigatetheapplicationvalueofT-SPOT．TBindiagnosisofTB．Methods248patientswithsus-pectedTBweredetectedbytheT-SPOT．TBtestandtuberculinskintest（TST）．Thesensitivity，specificity，falsepositiverateandfalsenegativerateintwotestswascompared．ResultsThesensitivityandspecificityofT-SPOT．TBtestwassignificantlyhigherthanthoseof TSTtest（P＜0.05）；thefalsepositiverateandfalsenegativerateofT-SPOT．TBtestwassignificantlylowerthanthoseofTSTtest（P＜0.05）．Conclusion TheT-SPOT．TBtesthasahighersensitivityandspecificity．Itisaneffectivemethodintuberculosisscreeningtest． 【Keywords】Tuberculosis；TuberculosisinfectionofTcellsspottest；Tuberculintest

我国流行病学调查发现因结核病而导致死亡的人数达到 13万人/年［1］。由于结核菌可侵犯机体多种器官组织，故临 床症状较为复杂， 尤其是肺外结核因起病隐匿或临床症状不典型，极易导致疾病误诊［2］ 。目前临床常采用结核菌素试验（TST）对结核病进行筛查，但其存在假阳性率较高，易受到患 doi：10．3969/j．issn．1009－6663．2012．09．043 基金项目：南京市卫生局青年科技基金（编号：YKK11114）作者单位：210006 江苏南京，南京医科大学附属南京医院感染科 通讯作者：曾娟， E-mail：zengjuan088@126．com者自身免疫状况影响等缺点。而国外研究结果显示，结核感 染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）是诊断结核病的有效检测方法，具有较高的敏感性和特异性 ［3，4］ 。因此本研究拟探讨结 核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）在结核病诊断中的应用价值。 临床资料 一、 248例疑似结核患者均为本院20xx年2月～20xx年1月期间门诊或住院治疗病人，其中男性132例，女性116例， 平均年龄为（46.2±5.7）岁，肺结核及肺外结核疾病明确诊断根据临床表现、影像学检查、病原学检查、组织病理学以及对抗痨治疗反应等。 二、检测方法1T-SPOT．TB检测方法 根据试剂盒说明书步骤进行 操作。首先抽取所有患者外周静脉血液5ml， 分离出外周血单个核细胞（PBMC）。在已包被抗IFN-γ抗体微量板的4个 孔中， 分别加入不同的阳性对照物：植物血凝素，阴性对照细胞培养液， A抗原早期分泌性靶抗原6（ESAT-6）以及B抗原滤液培养蛋白10（CFP-10）。然后依次向每孔加入2×105浓度PBMC，放置在37℃条件下的CO2培养箱内孵育处理20h。 PBS溶液洗脱处理后再加入碱性磷酸酶标记的抗γ干扰素抗体，在室温条件下孵育处理2h，PBS溶液洗脱处理后显色，采 用PBS溶液终止反应。最后仔细计数斑点数。阳性结果为：测量孔点数是阴性对照的两倍以上或者比阴性对照多5个点。 2 结核菌素实验 取0.1ml体积的PPD（含5单位结 核菌素）对患者行前臂尺侧皮内试验， 2～3d后观察检测结果。TST阳性结果为硬结直径≥

10mm。 三、评价指标采用灵敏性、特异性、假阳性率和假阴性率等作为诊断试验的评价指标。四、统计学处理方法 采用SPSS13.0统计软件进行分析， 采用χ2 检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。 结果 一、临床诊断结果 248例疑似结核患者中共确诊结核病87例，其中肺结核45例，肺外结核42例。二、 T-SPOT．TB试验与最终诊断结果比较T-SPOT．TB试验的灵敏度为85.1%（74/87），特异度为 88.8%（143/161），假阴性率为14.9%（13/87），假阳性率为11.2%（18/161），见表1。 表1 T-SPOT．TB试验与最终诊断结果比较 T-SPOT．TB试验最终诊断结果 结核病 非结核病合计阳性74（85．1%）18（11．2%）92阴性 13（14．9%） 143（88．8%） 156 三、 TST试验与最终诊断结果比较TST试验的灵敏度为71.3%（62/87），特异度为72.0%（116/161），假阴性率为28.7%（25/87），假阳性率为28.0%（45/161），见表2。 表2 TST试验与最终诊断结果比较 TST试验最终诊断结果 结核病 非结核病合计阳性62（71．3%）45（28．0%）107阴性 25（28．7%） 116（72．0%） 141 四、两种检测方法比较T-SPOT．TB试验的灵敏度和特异度明显高于TST试验（P＜0.05）；而假阴性率和假阳性率明显低于TST试验（P＜0.05）。 讨 论 对感染结核杆菌的患者进行早期诊断和治疗是改善其疾 病预后的关键， 也是目前发展中国家结核防治工作的重点。结核菌素试验（TST）是一种临床广泛常用的结核筛查方法，具有操作过程简单，检测快速等优点，常作为经验性抗结核治 疗的实验室检查依据， 但由于我国人群卡介苗接种率较高，进而导致TST假阳性率偏高，且极易受到机体自身免疫状态的 影响，故限制了其临床应用。结核病原学是诊断结核的金标准，但常规细菌培养需要较长的时间，而且受到标本细菌数量 的影响， 容易出现假阴性。因此，寻找新的快速且准确的诊断方法对于结核疾病的控制与预防十分重要。 T-SPOT．TB试验是由酶联免疫斑点（Enzymelinkedim-munospotassay，ELISPOT）发展而来检测结核疾病的新型方法，其作用原理为使用结核分枝杆菌特异性抗原刺激PBMC，通过细胞因子干扰素（IFN-γ）的分泌检测抗原特异性T淋巴细胞的应答反应情况， 进而对患者的结核感染状态进行判断，故具有较高的敏感性和特异性［5，6］ ，且T-SPOT．TB的敏感性不会受到机体免疫状态的影响［7］ 。 本研究结果显示， T-SPOT．TB试验的灵敏性和特异性明显高于TST试验（P＜0.05）；T-SPOT.TB试验的假阳性率和假阴性率明显低于TST试验（P＜0.05）。由此可知， T-SPOT.TB试验具有较高的灵敏性和特异性，其应用于结核疾病的筛查可以使患者尽早明确诊断，及时得到针对性治疗避免误诊的发生，还可以降低住院费用，是结核筛检的有效试验方法。 参考文献 ［1］全国结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国结核病流行病 学抽样调查办公室．20xx年全国结核病流行病学抽样调查报告［J］．中国防痨杂志，2002，24：98－102．［2］YoonHJ，SongYG，ParkWI，etal．Clinicalmanifestationsanddi-agnosisofextrapulmonarytuberculosis［J］．YonseiMedJ，2004，45（3）：453－461． ［3］MeierT，EulenbruchHP，Wrighton-SmithP，etal．Sensitivityofa newcommercialenzyme-linkedimmunospotassay（T-SPOT．TB）fordiagnosisoftuberculosisinclinicalpractice［J］．EurJClinMi-crobiolInfectDis，2005，24：529－536． ［4］LiebeschuetzS，BamberS，EwerK，etal．Diagnosisoftuberculosis inSouthAfricanchildrenwithaT-cell-basedassay：aprospectivecohortstudy［J］．Lancet，2004，364（9452）：2196－2203．［5］Al-ZamelFA．Detectionanddiagnosisofmycobacteriumtuberculo-sis［J］．ExpertRevAntiinfectTher，2009，7（9）：1099－1108．［6］LalvaniA，PareekM．Interferongammareleaseassays：principles andpractice［J］．EnfermInfeccMicrobiolClin，2010，28（4）：245－252． ［7］KimSH，SongKH，ChoiSJ，etal．DiagnosticusefulnessofaT-cell-basedassayforextrapulmonarytuberculosisinimmunocompro-misedpatients［J］．AmJMed，2009，122（2）：189－195． ［收稿日期：2012－03－22］

结核感染Ｔ细胞斑点试验在结核性疾病中的诊断价值

张瑛 孙亚蒙 徐欣晖 吕利雄

【摘要】 目的 评价γ 唱干扰素释放分析结核感染Ｔ细胞斑点试验（Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ）检测在结核性疾病中的诊断价值。方法 对仁济医院疑诊或待排结核患者进行Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测。结果 Ｔ唱 ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测在结核性疾病阳性检出率为９４畅４％（１７／１８），明显高于ＰＰＤ的４７畅１％（８／１７）、结核抗体检查的１２畅５％（２／１６）、结核ＰＣＲ的１６畅７％（２／１２）、抗酸杆菌涂片的７畅７％（１／１３）、结核菌培养的 ２７畅３％（３／１１），差异有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测诊断结核性疾病敏感性、特异性分别为９４畅４％、９５畅２％，显著优于ＰＰＤ。结论 Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测是诊断结核的快速敏感方法，在结核性疾病诊断中有重要价值。 【关键词】 结核； 敏感性与特异性； 结核感染Ｔ细胞斑点试验； γ干扰素释放试验Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｖａｌｕｅｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ唱ｇａｍｍａｒｅｌｅａｓｅａｓｓａｙＴ唱ＳＰＯＴ．ＴＢｆｏｒｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ＺＨＡＮＧＹｉｎｇ，ＳＵＮＹａ唱ｍｅｎｇ，ＸＵＸｉｎ唱ｈｕｉ，ＬＶＬｉ唱ｘｉｏｎｇ倡 ．倡 ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｍｅｒｇｅｎｃｙ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００１２７，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＶＬｉ唱ｘｉｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｒｅｎｊｉｌｅｏ＠１６３畅ｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｖａｌｕｅｏｆａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ唱ｇａｍｍａｒｅｌｅａｓｅａｓｓａｙＴ唱ＳＰＯＴ．ＴＢｉｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｕｓｐｅｃｔｅｄｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｉｎＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌｒｅｃｅｉｖｅｄＴ唱ＳＰＯＴ．ＴＢａｓｓａｙｉｎｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ（ＰＢＭＣｓ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔ唱ＳＰＯＴ．ＴＢａｓｓａｙ，ＰＰＤ，ａｎｔｉ唱ＴＢａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｓｔ，Ｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ａｃｉｄ唱ｆａｓｔｂａｃｉｌｌｉｓｔａｉｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｓｆｏｒＭｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎ９４畅４％（１７／１８），４７畅１％（８／１７），１２畅５％（２／１６），１６畅７％（２／１２），７畅７％（１／１３）ａｎｄ２７畅３％（３／１１），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｃｔｉｖｅｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅＴ唱ＳＰＯＴ．ＴＢｗｅｒｅ９４畅４％（Ｐ＜０畅０５ｂｅｔｗｅｅｎＰＰＤａｎｄＴ唱ＳＰＯＴ．ＴＢ）ａｎｄ９５畅２％（Ｐ＜０畅０５ｂｅｔｗｅｅｎＰＰＤａｎｄＴ唱ＳＰＯＴ．ＴＢ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔ唱ＳＰＯＴ．ＴＢａｓｓａｙｉｓｒａｐｉｄａｎｄｈｉｇｈ唱ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｅｓｔｓｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｎｇｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ； Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ； Ｔ唱ＳＰＯＴ．ＴＢ； Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ唱ｇａｍｍａ ｒｅｌｅａｓｅａｓｓａｙ 结核病是全球严重的公共卫生问题之一，据ＷＨＯ估计，全球有约２０亿人感染结核分枝杆菌，每年有约２００万人死于结核［１唱２］ 。卫生部已将结核病列为全国重点控制的重大疾病之一。近年来结核病的发病率有 上升趋势。结核菌可侵犯全身各个系统，导致临床表现复杂多变，尤其是肺外结核常因病情隐匿或表现不 典型，极易误诊漏诊［３］ 。传统的临床诊断结核的实验室方法有限。因而，发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术十分重要。 酶联免疫斑点（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＰＯＴ）技术是一种新型的免疫酶技术，从单细胞

水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞。由ＥＬＩＳＰＯＴ发展而来的结核感染Ｔ细胞斑点试验技术（Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ），使用结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ＰＢ唱ＭＣ），通过细胞因子γ干扰素（ＩＦＮ唱γ）的分泌检测抗原特异性Ｔ淋巴细胞的应答反应，从而判断结核感染状 ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４唱０７８５．２０１０．１２．０１７ 基金项目：上海市公共卫生优秀学科带头人项目（０８ＧＷＤ１６） 作者单位：２００１２７ 上海交通大学医学院附属仁济医院神经内科（张瑛、孙亚蒙），急诊科（徐欣晖、吕利雄）通讯作者：吕利雄，Ｅｍａｉｌ：ｒｅｎｊｉｌｅｏ＠１６３．ｃｏｍ? １３４２?中华临床医师杂志（电子版）２０１０年１２月第４卷第１２期 ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１５，２０１０，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．１２态，具有较高的敏感性和特异性［４唱５］ 。本文就Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测对结核性疾病的诊断价值进行初步探讨。 对象与方法 １畅对象：对２００９年５月至２０１０年５月上海仁济医院急诊观察室、急诊监护室及神经内科急诊／病房疑 诊或待排结核患者在其他详细检查基础上同时行Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测。收集资料较为齐全的患者共４２例，年龄２２～７６岁，其中入院诊断为发热待查１８例，颅内感染９例，胸腔积液９例，腹水６例，病程３ｄ～３个月。根据以下标准，将患者分为：（１）结核性疾病，包括肯定结核性疾病：结核杆菌培养阳性（金标准）；很可能结核性疾病：结核杆菌培养阴性，但临床表现、影像学或病理学检查支持结核，且抗结核治疗有效；（２）非结核性疾病：临床表现明确系其他疾病所致，或者经其他治疗（未经抗结核治疗）病情改善。剔除不符合上述条件患者３例，共３９例患者进入本研究。 ２畅Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ试验：采用上海复星科技有限公司提供的试剂盒。基本步骤如下：取枸橼酸钠抗凝静脉血５ｍｌ，分离ＰＢＭＣ放在包被ＩＮＦ唱γ抗体的微孔板，加入结核特异性抗原早期分泌靶向抗原（ＥＳＡＴ唱６）和培养滤过蛋白（ＣＦＰ唱１０）作为刺激原，温箱培养２４ｈ后，洗去抗原致敏效应Ｔ淋巴细胞，加入生物素标记的二抗，再经酶联显色，在细胞因子分泌的地方形成斑点，通过记录斑点数检测结核特异抗原致敏的效应Ｔ淋巴细胞数量。结果判断：当空白对照孔内斑点数＜６时，任一实验孔斑点数减去空白孔斑点数≥６，结果即为阳性；若空白对照孔斑点数＞６，任一实验孔斑点数大于空白孔斑点数的两倍，结果也表示阳性。 ３畅统计学处理：应用ＳＰＳＳ１６畅０统计软件，采用卡方检验（Ｃｈｉ唱Ｓｑｕａｒｅｔｅｓｔ）进行统计学分析。Ｐ＜０畅０５为差异有统计学意义。 结 果 １畅患者一般资料：３９例患者中，诊断结核性疾病１８例，分别为结核性胸膜炎４例、盆腔结核３例，结核性腹膜炎３例、结核性脑膜炎２例、脊柱结核２例，淋巴结结核、结核性心包炎、肠结核、肾结核各１例。非结核性疾病２１例。两组患者的临床资料见表１。 表１ 两组患者的临床资料 组别 例数 男性［例，（％）］ 年龄（岁，珋ｘ±ｓ） 入院诊断［例，（％）］ 发热待查 颅内感染 胸腔积液 腹水待查 与免疫低下相关疾病或状况［例，（％）］既往 糖尿病既往免疫 系统疾病既往 恶性肿瘤既往免疫 抑制剂应用史ＨＩＶ 检测阳性妊娠 结核性疾病１８ ７（３８畅９） ４９畅８±１４畅１ ９（５０畅０）２（１１畅１）４（２２畅２）３（１６畅７）２（１１畅１） １（５畅６） ０（０） １（５畅６） ０（０） １（５畅６） 非结核性疾病 ２１１０（４７畅６）４６畅０±１５畅０８（３６畅４）７（３３畅３）３（１４畅３）３（１４畅３）２（１１畅１）０（０）０（０）０（０）０（０）０（０） ２畅Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ试验与其他结核诊断试验的比较：本研究３９例患者均做Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测，同时行 ＰＰＤ检查的患者３４例，结核抗体检查３２例，结核ＰＣＲ检查２６例，抗酸杆菌涂片２６例，结核杆菌培养２３例，检查阳性率详见表２。Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测在结核性疾病的阳性检出率显著优于其他检查方法，差异有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。 表２ Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测与其他结核诊断

试验的比较（％，阳性例数／总检查例数） 组别例数ＰＰＤ结核抗体检查结核ＰＣＲ抗酸杆菌涂片结核菌培养Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测结核性疾病１８４７畅１（８／１７）１２畅５（２／１６）１６畅７（２／１２）７畅７（１／１３）２７畅３（３／１１）９４畅４（１７／１８）非结核性疾病 ２１ ２９畅４（５／１７） １２畅５（２／１６） ７畅１（１／１４） ０（０／１３） ０（０／１２） ４畅８（１／２１） ３畅Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测诊断结核病方法学评价：１８例结核患者中１７例Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测阳性，敏感性为 ?２３４２?中华临床医师杂志（电子版）２０１０年１２月第４卷第１２期 ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１５，２０１０，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．１２ ９４畅４％，１８例中１７例作ＰＰＤ试验，８例为阳性结果，敏感性为４７畅１％，两者比较差异有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）；２１例非结核性疾病患者中２０例Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测阴性，特异性为９５畅２％，２１例中１７例作ＰＰＤ试验，１２例阴性，特异性为７０畅６％，两者比较差异有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测在敏感性、特异性上均显著优于临床常用的ＰＰＤ。 讨 论 近年结核病疫情呈明显上升趋势，全球所有传染性疾病中，结核病已成为成年人的首位死因。对于感染结核的患者进行早期诊断和治疗是改善患者预后的关键，也是控制结核播散的重要环节。结核菌素试验（ＴＳＴ）是临床常用的筛查结核的免疫学方法，因操作简单、快速，在临床上广为应用，并常作为启动经验性抗结核治疗的依据，但有较高的假阳性和假阴性。细菌学是诊断结核的金标准，但常规培养需要２个月的时间，ＢＡＣＴＥＣ法一般也须两周可分离出分枝杆菌，而且阳性率取决于采集标本中细菌的数量，不利于早期诊断与治疗。血清学诊断可成为结核病的快速辅助诊断手段，但特异性欠强，敏感性较低。体外核酸扩增技术即聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自１９８９年法国学者Ｂｒｉｓｓｏｎｎｅｏｌ等首先报道用于诊断结核病，为结核病的快速诊断开辟了新途径，但由于其假阳性率较高影响了结果的可靠性，其临床应用受到了一定的限制［４］ 。 基于Ｔ细胞的γ干扰素释放试验（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ唱ｇａｍｍａｒｅｌｅａｓｅａｓｓａｙ，ＩＧＲＡ）是结核诊断领域期待已久的 最新进展 ［６］ 。其原理是当体内曾经受到结核杆菌抗原刺激而致敏的Ｔ淋巴细胞再次遇到同类抗原时能 产生ＩＦＮ唱γ。可通过检测γ干扰素浓度（ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ唱ＴＢＧｏｌｄ）或进行Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ从单细胞水平检测分泌γ干扰素细胞数目，准确判断机体是否存在结核感染。ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ唱ＴＢＧｏｌｄ和Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测采用的结核杆菌特异抗原为早期分泌靶向抗原（ＥＳＡＴ唱６）和培养滤过蛋白（ＣＦＰ唱１０），具有高度特异性，与卡介苗或环境中大多数非结核分枝杆菌不存在抗原交叉，表现出优异的敏感性和特异性，迅速得到美国ＦＤＡ及欧盟、加拿大、日本等管理机构认可而运用于临床。有不少临床证据表明，Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ较ＱｕａｎｔｉＦＥＲ唱ＯＮ唱ＴＢＧｏｌｄ敏感性更高［６唱７］ 。 Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测对免疫正常的成年人活动性结核诊断的敏感性为８３％～９７％，综合敏感性９０％ ［５唱６，８］ 。 Ｋｉｍ等 ［９］ 随诊７２例怀疑肺外结核患者的前瞻性研究显示，对于活动性肺外结核，Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ和ＰＰＤ的敏感 性分别为９４％和４７％，二者比较差异具有显著性（Ｐ＜０畅００１）。免疫抑制状态并不影响Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ的敏感性 ［１０］ 。Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测也显示良好的特异性。Ｐａｉ等 ［１１］ 的Ｍｅｔａ分析中纳入了６项研究，其中５项中的受试 者都常规地接受ＢＣＧ免疫，６项研究共包括２９０名受试者，９３％为无结核接触史的健康成年人，诊断结核的综合特异性９３％（８５％～１００％）。 本研究对疑诊或待排结核的患者在进行其他详细检查基础上同时进行Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测。结果表明， Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测诊断结核性疾病敏感性为９４畅４％，特异性为９５畅２％，与文献报道相似。且敏感性、特异性上均显著优于临床常用的ＰＰＤ，本研究ＰＰＤ敏感性为４

７畅１％，特异性为７０畅６％，差异均有统计学意义 （Ｐ＜０畅０５）。与其他结核相关检查相比，阳性检出率明显高于结核抗体检查（１２畅５％）、结核ＰＣＲ（１６畅７％）、抗酸杆菌涂片（７畅７％）、结核菌培养（２７畅３％），差异有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。表明Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测与现有的一些结核诊断手段相比，具有明显的优势，在结核病诊断中有重要价值。 目前的结核病许多没有特异临床表现，本组最后明确诊断结核病患者中，大多为肺外结核患者，缺乏典型的影像学特征，临床表现复杂、隐匿。而如本研究所见，ＰＰＤ、结核抗体检查、抗酸杆菌涂片等方法不 够敏感特异，结核菌培养仅３例阳性（２７畅３％），且均在患者好转出院或转院后才出的结果，对患者诊断价值有限。因而这些表现不典型的结核病患者仅靠现有的结核诊断手段，极易漏诊、误诊、延误治疗，对预后不利。尤其对结核性脑膜炎患者而言，延误治疗的后果是死亡率的明显增高。Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ技术有很高的敏感性和特异性，所需时间少，２４ｈ即可取得结果，尽管目前操作较繁琐，成本较昂贵，限制了该方法在临床的推广与应用，但对临床症状不典型、诊断不明确、病情凶险、易引发纠纷的患者同时进行Ｔ唱ＳＰＯＴ畅ＴＢ检测，其结果可为患者的早期诊断、及时制订治疗方案提供帮助。 ? ３３４２?中华临床医师杂志（电子版）２０１０年１２月第４卷第１２期 ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１５，２０１０，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．１２