血红蛋白电泳检查(电泳法)
1. 原理
血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同。本实验在碱性(PH=8.60)条件下,以琼脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后,肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。
2. 标本采集
2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。
2.2 标本种类:抗凝血
2.3 标本要求:抗凝剂选用EDTA,柠檬酸或肝素均可,避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml,加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中,充分混匀。
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911例血红蛋白电泳结果分析
【关键词】 血红蛋白电泳;地中海贫血;基因诊断
[摘 要] 目的:探讨血红蛋白电泳在地中海贫血(地贫)筛查中的作用。方法:对9 315例育龄人群初筛出红细胞脆性降低者,应用法国Sebia全自动电泳分析系统进行血红蛋白电泳,通过自动扫描系统分析,检测Hb各组分的含量,初步分为属于α地贫或β地贫,再通过基因诊断确诊。结果:在9 315例育龄人群中,红细胞脆性降低者911例(9.78%)。进一步通过血红蛋白电泳分为α地贫表型阳性727例,阳性率7.8%,β地贫表型阳性177例,阳性率1.9%。基因诊断结果显示,α地贫初筛符合率60.5%,β地贫初筛符合率80%。结论:血红蛋白电泳能够定量检测HBA、HbF、HbA2含量,将地贫进行初步分类为α地贫或β地贫,有效地筛查出高危夫妇,为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础。 [关键词] 血红蛋白电泳;地中海贫血;基因诊断
血红蛋白电泳能够定量检测HbA、HbF、HbA2含量以及其他异常血红蛋白,常用于诊断地中海贫血(地贫)和血红蛋白病。地贫是我国长江以南发病率最高,危害最大的一种遗传病。据广东省流行病学调查α地贫杂合子为7.3%,β地贫携带者为1.83%~3.36%,合计近10%,对人们的健康和优生构成了很大的威胁。现把我们自20xx年3月至20xx年3月利用血红蛋白电泳进行地贫筛查的情况报道如下。
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第16节 血红蛋白电泳操作与扫描
一. 样品的采集与处理:
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血红蛋白电泳操作规程
血红蛋白电泳操作规程
一.项目名称
血红蛋白电泳(HYDRAGEL HEMOGLOBIN)
二.检验方法名称
琼脂糖凝胶区带电泳
三.方法学原理
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同,这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行,在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白,分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色,烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。
四.方法学溯源
自19xx年由Tiselius发现了移界电泳(moving boundary eectrophoresis),而后,这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳(zone elecrrophoresis)所克服,区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
五.仪器
(一) 型号:SEBIA HYDRASYS (PN1210)
(二) 分析和计算参数:
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血红蛋白电泳检查(电泳法)
1. 原理
血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同。本实验在碱性(PH=8.60)条件下,以琼脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后,肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。
2. 标本采集
2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。
2.2 标本种类:抗凝血
2.3 标本要求:抗凝剂选用EDTA,柠檬酸或肝素均可,避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml,加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中,充分混匀。
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地中海贫血论文:云南省地中海贫血的遗传流行病学及应用血红蛋白电泳筛查地中海贫血的研究
【中文摘要】云南省地中海贫血的遗传流行病学,确定云南省地中海贫血的基因携带率;对比云南省籍贯与省外籍贯,以及云南省各个民族、地区之间的血红蛋白电泳筛查的结果推断地中海贫血的发病情况;探讨云南省地中海贫血的血红蛋白电泳筛查的截断值,为云南地区的地中海贫血的血红蛋白电泳筛查提供更加适合的截断值。资料和方法分析血红蛋白电泳筛查结果共10181例并从中选取疑似地贫患者340例进行基因诊断,结合血常规数据和病人的籍贯、民族,用X2检验和T检验进行统计分析,对比各个民族、地区之间有无统计学差异。运用正态分布图结合ROC曲线对各种血红蛋白,特别是Hb A2和Hb F的诊断意义和最佳截断值进行探讨。结果1.在10181例血红蛋白电泳筛查的样本中,可检出的6种α地贫的携带者占总人群的1.05%,云南省可检出的18种β地贫的携带者占总人群的3.55%,由此推断云南省可检出的地贫携带者约占总人群的4.60%。此结果与实际情况可能略有偏差。2.(1)未出现异常条带的人群中,Hb A2的含量(%)的分布呈近似正态分布,均值为2.82,标准偏差为
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MCV和RBC脆性及血红蛋白电泳联合检测
在地中海贫血中的应用
【摘要】目的 通过对分别进行平均红细胞体积(MCV)和红细胞的渗透脆性(RBC脆性)及血红蛋白电泳单项和联合检测,研究探索临床诊断地中海贫血的正确方法,从而避免和防止地中海贫血漏诊问题的发生。方法 选取我院20xx年8 月至20xx年8月期间到医院门诊及住院治疗的80 例地中海贫血病人与60例非地中海贫血病人,进行平均红细胞体积、红细胞脆性试验和血红蛋白电泳进行单项和联合检测对比分析。结果 分别进行MCV、红细胞脆性及血红蛋白电泳的单项检测,对地中海贫血诊断的灵敏度和特异度分别是90.1%、77.4%、 71.2%和70.2%、91.1%、91.9%;进行MCV、红细胞脆性及血红蛋白电泳联合检测,其灵敏度和特异度是100%、61.8%。单项的MCV、RBC脆性及血红蛋白电泳的阳性例数分别为71例、58 例和51例,联合检测阳性数为48例。结论 MCV与RBC脆性试验,血红蛋白电泳的单项检测,虽然对地中海贫血进行临床检测和筛查的具有着十分重要的意义和价值,然而对部分地中海贫血病人,其单项检测也会显现正常的结果,因此在临床、产前的筛查当中,联合检测要比单项检测具有优越。进行MCV和RBC脆性及血红蛋白电泳的联合检测,对于及时、正确地诊断地中海贫血,有效地而避免和防止漏诊问题,具有十分重要意义和作用。
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多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段及琼脂糖凝胶电泳产物检测
一、实验目的:
1、了解PCR技术的基本操作
2、理解PCR的原理
3、讨论PCR的应用
二、实验原理:
PCR是一种在体外模拟细胞内环境进行迅速扩增DNA片段的技术,这一技术需要模板、四种脱氧核苷酸等组分条件外,还需要不同温度环境以进行DNA的解旋和聚
1、PCR反应组分
细胞内DNA复制条件分析:
此外,试验中用到的还有Mgcl2,Mg2+能激活酶的活性;10* Buffer 缓冲液,为Taq酶提供合适的PH条件。
2、PCR反应条件
PCR利用了DNA的热变性原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合,现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。
PCR一般经历三十多次循环,每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸。
(!)变性(模板DNA解旋)
模板DNA经加热至90℃以上。一定时间后,使模板DNA双链解离,使成为单链,以便于它与引物结合,为下轮反应作准备。
(2)复性(退火)
模板DNA经加热变性成单链后,温度降到50℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
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