人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂技术审查指导原则（征求意见稿）

一、前言

本指导原则旨在指导注册申请人对人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。

本指导原则是针对人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要详细阐明理由，并对其科学合理性进行验证，提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

二、适用范围

人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）属于乳多空病毒科的乳头瘤病毒属，是一种小分子的、无被膜包被的、环状双链DNA病毒，基因组长约8000碱基对（bp），分为3个功能区，即早期转录区（E区）、晚期转录区（L区）和非转录区（长

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《人乳头瘤病毒核酸分型检测标准操作规程》

1. Intended Use目的

通过病毒核酸扩增定性检测人体宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒分型。

2. Sphere of Application适用范围

人乳头瘤病毒分型定性检测。

3. Principle of Test检验方法及原理

采用多重PCR技术对检测样品的核酸DNA进行扩增，并用包被有核酸探针的多种编码微球和扩增产物进行杂交，结果用流式阵点仪检测分析。流式荧光杂交法是将PCR扩增产物盒微球液进行混和，并经过杂交、荧光素标记、Luminex流式分析仪阅读得到相应的检测结果。微球杂交液中包含多种荧光编码微球，每种荧光荧光编码微球的表面都共价交联有与亚型对应的寡核苷酸探针，在杂交过程中探针特异性识别并结合PCR产物中的靶序列，经过和荧光素反应后形成微球-探针-扩增产物-荧光素的复合物，经Luminex流式分析仪阅读时，可获得每种复合物的微球编码及其对应的荧光强弱信号，最后经过透景HPV专用的分析软件判读相应的检测结果。

4. Specimen Collection使用的样本

4.1. 样本种类：阴道或尿道分泌物。

4.2. 收集方法：医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌

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开展人乳头瘤病毒检测的可行性报告

一、 基本情况

在全球范围内，每年约有20多万女性死于宫颈癌。在发展中国家，宫颈癌则属于常见多发的妇科肿瘤，排行榜首。我国每年新发现的病例为13.15万，发病率占世界的1/3，患者的年龄越趋年轻，发病史缩短。而宮頸癌是唯一可以通过篩查而预防的癌症。而人乳头病毒是导致宫颈癌的高危（必要）因素。

20xx年在巴黎召开的“EUROGIN”子宫颈癌全球防御大会一致认为：人乳头瘤病毒（HPV DNA）检测是宫颈病变及宫颈癌筛查的最佳方法。20xx年被中国宫颈癌筛查及早诊早治指引采纳。结合高危人乳头瘤病毒（HPV DNA）检测与细胞学检查比单独细胞学检查更具经济效益。

二、 方案

引进人乳头瘤病毒检测，该检测则是对宫颈癌预防及早期发现最有效的检测，不仅可以监测病人病毒的分型，而且对早期宫颈癌的发现和治疗非常有价值。高危人乳头瘤病毒（HPV DNA）阳性比细胞学检测能更准确预测宫颈癌病变。

三、 临床意义

.操作简便快捷, 检测的通量大

.检测灵敏度高，<0.1pg/ml，5000拷贝/ml

.特异性高（双重特异性：引物特异性及探针特异性）

.采用UNG技术及闭管操作，有效消除产物污染风险；

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人乳头瘤病毒分型检测应用于宫颈癌筛查研究进展

摘要：

关键词：人乳头瘤病毒；宫颈癌；基因型；HR-HPV；持续性感染

宫颈癌位于全球妇女恶性肿瘤发病率的第二位，其发病率仅次于乳腺癌，是女性常见恶性肿瘤之一。我国每年约有10万人罹患宫颈癌，且有80%的患者死亡于该病，近年来有年轻化趋势。随着宫颈癌筛查体系的建立及人乳头瘤分型检测工作的广泛开展，宫颈癌的发病率大幅度下降。本文就人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈病变的关系及HPV分子检测方法作一综述。

1.HPV感染导致宫颈癌的致病机制：

早在20世纪70年代末期，有学者提出HPV与宫颈癌有关。此后，就HPV与宫颈癌的关系进行了大量的研究，直到19xx年国际癌症协会才确定HPV感染是宫颈癌发生的必要条件[1,2]。宫颈癌的发生和发展是一个先渐变后突变的过程。Sawaya等【4】认为由宫颈上皮细胞的低度不典型增生发展到高度不典型增生，平均只需要9年时间；但由高度不典型增生发展到浸润性癌仅需3个月到2年；由于宫颈癌的癌前病变阶段较长，其发生主要与持续反复的HPV感染有关，后者可提高宫颈癌风险250倍。因此，HPV检测对宫颈癌的筛查和早期诊断，有效阻断病变过程，从而降低发病率和死亡率具有非常重要的临床价值。

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人乳头瘤病毒如何检查的

　人乳头瘤病毒主要就是引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，根据侵犯的组织部位不同可分为低危型与高危型。低危型表现一般即为寻常疣、扁平疣、跖疣等，高危型表现亦为赘生疣状物但其油状表皮发育不良已发生恶变从而导致皮肤癌。

　　【检查】

　　1、电镜检查 HPV是最早在电镜下观察到的病毒之一，将活检标本负染，若能在电镜下见到特征性的病毒颗粒，即可作出诊断;而用免疫电镜可提高检出率。电镜检查法虽然准确率很高，但费时，需特殊仪器设备，且检出阳性率很低。

　　2、PCR技术 应用此法可检测HPV-DNA，还可进行基因分型。灵敏度可达1fg，该法操作简便省时，而且标本来源不受限制，如病变组织或脱落细胞，分泌物或黏液，新鲜标本或保存已久的石蜡切片等标本均可。

　　3、血清学检查 目前尚不能用血清学方法对HPV进行确诊及分型。为发展型特异性血清学试验现正在研究试用基因工程表达产生的晚期蛋白来检测患者血清中相应的抗体。初步认为，L1和L12蛋白可用于检测HPV型特异性免疫应答。

　　4、核酸杂交技术 核酸分子杂交技术不仅能对HPV进行确诊，而且还能对HPV进行分型。利用放射性核素或生物标记的HPV-DNA探针来检测患者标本中是否存在互补的核酸链。最常用的方法为斑点杂交法，其次为DNA印迹法及原位杂交。

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如何检查人乳头瘤病毒

人乳头瘤病毒的患病人群现在越来越广，很多人发现一些类似人乳头瘤病毒的症状就担心自己是否也患上了此病，那么如何检查人乳头瘤病毒?对此一起来跟专家详细了解一下。

如何检查人乳头瘤病毒?

1、电镜检查 HPV是最早在电镜下观察到的病毒之一，将活检标本负染，若能在电镜下见到特征性的病毒颗粒，即可作出诊断;而用免疫电镜可提高检出率。电镜检查法虽然准确率很高，但费时，需特殊仪器设备，且检出阳性率很低。

2、PCR技术 应用此法可检测HPV-DNA，还可进行基因分型。灵敏度可达1fg，该法操作简便省时，而且标本来源不受限制，如病变组织或脱落细胞，分泌物或黏液，新鲜标本或保存已久的石蜡切片等标本均可。

3、血清学检查 目前尚不能用血清学方法对HPV进行确诊及分型。为发展型特异性血清学试验现正在研究试用基因工程表达产生的晚期蛋白来检测患者血清中相应的抗体。初步认为，L1和L12蛋白可用于检测HPV型特异性免疫应答。

4、核酸杂交技术 核酸分子杂交技术不仅能对HPV进行确诊，而且还能对HPV进行分型。利用放射性核素或生物标记的HPV-DNA探针来检测患者标本中是否存在互补的核酸链。最常用的方法为斑点杂交法，其次为DNA印迹法及原位杂交。

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检验科开展聚合酶链反应技术（简称PCR技术）

人乳头瘤病毒（HPV）检测

一、病毒简介：

宫颈癌是可以预防的，关键在于早发现、早治疗。人乳头瘤病毒(HPV)是引起宫颈癌的主要“元凶”，通过HPV检测可以帮助了解是否存在HPV感染、是否有发生宫颈癌的风险。HPV病毒是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖.目前已分离出130多种，该病毒只侵犯人类，对其它动物无致病性，人体一旦感染会终生携带。生物学活性：HPV抵抗力强，能耐受干燥并长期保存，加热或经福尔马林处理可灭活，所以高温消毒和2%戊二醛消毒可灭活。不同的型别引起不同的临床表现，根据侵犯的组织部位不同可分为：

1、黏膜低危型如HPV-6、11、13、32、34、40、42、43、44、53、54等与感染生殖器、肛门、口咽部、食道黏膜；

2、黏膜高危型HPV-16、18、30、31、33、35、39与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。

二、HPV感染途径

1、性传播途径；

2、密切接触；

3、间接接触：通过接触感染者的衣物、生活用品、用具等；

4、医源性感染：医务人员在治疗护理时防护不好，造成自身感染或通过医务人员传给患者；

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高危型人乳头瘤病毒分型

高危型人乳头瘤病毒是当下传播性极强的一种性疾病，人乳头瘤病毒是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，可引起人类上皮的良性和恶性肿瘤。一起来看看专家对高危型人乳头瘤病毒的详细介绍。

高危型人乳头瘤病毒分型：

人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖.目前已分离出130多种，不同的型别引起不同的临床表现，根据侵犯的组织部位不同可分为:

(1)皮肤低危型：包括HPV1、2、3、4、7、10、12、15等与寻常疣、扁平疣、跖疣等相关;

(2)皮肤高危型：包括HPV5,8，14，,17,20,36,38与疣状表皮发育不良有关，其他还与可能HPV感染有关的恶性肿瘤包括：外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌;

(3)黏膜低危型如HPV-6，11，13，32，34，40，42，43，44，53，54等与感染生殖器、肛门、口咽部、食道黏膜;

(4)黏膜高危型HPV-16、18、30、31、33、35、39与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。

人乳头瘤病毒感染毒不能在体外培养。100多个型，型间DNA的同源性低于50%HPV对皮肤和黏膜上皮细胞有高度亲嗜性，核酸原位杂交方法在皮肤基底层细胞可以检测到病毒早期基因;晚期基因仅在分化的角质细胞中检测到。病毒复制能诱导上皮增生，表皮变厚，伴有棘层增生和某些程度表皮角化，在颗粒层常出现嗜碱性核内包涵体上皮增生形成乳头状瘤，也称为疣。

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