间接血凝试验

    血凝试验(hemagglutinationtest)是红细胞凝集试验的简称。间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验，在临床检验中应用广泛，下面简述其操作过程。

间接血凝试验示意图

    (一)载体

    红细胞是大小均一的载体颗粒，最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。新鲜红细胞能吸附多糖类抗原，但吸附蛋白质抗原或抗体的能力较差。致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用2～3天。为此一般在致敏前先将红细胞醛化，可长期保存而不溶血。常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。红细胞经醛化后体积略有增大，两面突起呈圆盘状。

    醛化红细胞具有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的能力，血凝反应的效果基本上与新鲜红细胞相似。如用两种不同醛类处理效果更佳。也可先用戊二醛，再用鞣酸处理。醛化红细胞能耐60℃加热，并可反复冻融不破碎，在4~C可保存3～6个月，在—20℃可保存1年以上。

    (二)致敏

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口蹄疫正向间接血凝试验操作要点

免疫抗体检测是科学掌握动物免疫接种疫苗后抗体产生和消长变化的有效方法之一。口蹄疫正向间接血凝试验就是用口蹄疫抗原检测未知血清中是否含有口蹄疫抗体的血清学检测方法之一。近年来，此方法经常用于牲畜接种口蹄疫疫苗后能否产生抗体或抗体滴度能否达到免疫保护，以利于指导畜牧业生产。

一、原理

用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验，亦称间接血凝。 抗原与其对应的抗体相遇，在一定条件下形成抗原—抗体复合物。但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。将抗原吸附（致敏）在红血球表面，再与抗体结合，红血球便出现凝集现象，不仅肉眼能看见，而且反应的敏感性大大提高。口蹄疫正向间接血凝试验就是将口蹄疫纯化病毒致敏到绵羊红血球表面，制成口蹄疫血凝抗原，用于检测动物血清中的口蹄疫抗体水平。

二、适用范围

主要用于检测口蹄疫疫苗接种动物后血清抗体效价。

三、器材

1、 96孔110～120度V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻板。

2、 微量移液器与吸头。

3、 口蹄疫血凝抗原（口蹄疫正向血凝诊断液）。

4、 口蹄疫对照阴性血清。

5、 口蹄疫对照阳性血清。

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猪瘟、口蹄疫间接血凝操作方法

猪瘟、口蹄疫间接血凝操作方法

猪瘟间接血凝操作方法

一、 试验材料

1、 6孔110°-120°微量血凝板。

2、 10-100微升可调微量移液器

3、 塑料咀

4、 猪瘟间接血凝抗原（猪瘟正向血凝诊断液），每瓶5毫升，可检测血清25-30头份。

5、 阳性对照血清，每瓶2毫升；阴性对照血清每瓶2毫升

6、 稀释液每瓶10毫升

7、 待检血清每份0.2-0.5毫升（56℃水浴灭活30分钟）

二、 操作步骤

1、 检测前，应将冻干诊断液每瓶加稀释液5毫升浸泡7-10天后方可应用。

2、 稀释待检血清：在血凝板上的第一孔――第六孔各加稀释液50ul加入第一孔，混匀后从中取出50ul加入第二孔，依此类推直至第六孔混匀后丢弃50ul，从第一孔――第六孔的血清稀释度依次为1：2、1：

4、1：8、1：16、1：32、1：64。

3、 稀释阴性血清和阳性血清：在血凝板上的第11排第1孔加稀释液60ul，取阴性血清20ul混匀

后取出30ul丢弃。此孔即为阴性血清对照孔。

在血凝板上的第12排第1孔加稀释液70ul，第2孔――第7孔各加稀释液50ul 。吸取阳性血清10ul，加入第1孔混匀并从中取出50ul加入第2孔……直到第7孔混匀并丢弃50ul。该孔的阳性血清稀释

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动物寄生虫病学实验》课程教学大纲      

 

  课程编号：021638  学时：30学时

 

一、课程的性质、地位和任务

动物寄生虫病学是研究寄生于家畜、家禽及特种经济动物的各种病原性寄生虫及其所引起的疾病的一门学科，它是高等农业院校动物医学等专业的必修、主干专业课程之一。动物寄生虫病学实验是动物寄生虫病学的配套课程，是动物医学、动物检疫检验等专业的专业课。本课程的主要先修课为动物学、动物解剖与组织学、动物生理学、动物病理学、兽医药理学、兽医临床诊断学实验等实验课程。

        本课程的主要教学目标是让学生掌握寄生虫的形态构造、病理特征及动物寄生虫病学实验室诊断操作技术等。

二、课程教学基本要求

      通过本课程的学习，学生应掌握的知识与技能：

1、熟悉各类寄生虫的形态构造及常见虫种的形态特征。

2、能识别常见寄生虫的中间宿主。

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溶菌酶的提纯结晶和活力测定

姓名： 学号：

班级： 指导老师：

一、实验前言

1.实验背景

溶菌酶（lysozyme）是一种能够水解细胞壁成分中N- 乙酰胞壁酸与N- 乙酰葡萄糖胺之间的β- 1，4 糖苷键的酶，被广泛应用于医药、食品工业、生物工程等方面，现从鸡蛋蛋清中提取溶菌酶已达到工业化生产水平。蛋清中的溶菌酶含量越高，酶活力越强，越有利于鸡蛋的保存，因此测定鸡蛋蛋清中的溶菌酶对我国溶菌酶生产、禽蛋产品加工有重要的指导作用，也为蛋品质评定提供了一个重要参数。

活力测定的基本原理是用一种细菌悬液作为基质,加入待测标本后保持一定时间,如样品中含有溶菌酶则细菌被溶解,即其细胞壁不溶性多糖变成可溶性粘肤。测定方法很多:如平皿测定法、光电比浊法、粘度测定法、分解产物测定法(因为底物往往过量,通常不用底物)、化学滴定法、分光光度法及同位素技术,其中以平皿测定法和比浊法最为常用。

溶菌酶分布很广,而且不是单独存在的,往往是和许多因子共同作用、相互协调。同时,可以直接或间接地通过酶的分解产物而起作用。在这里许多问题正处于摸索阶段,有些方面通过特定的实验,预测其应用。而这些特定的实验往往对某种或某一个动物而言,还有其局限性。未定论的问题很多,许多应用尚未大面积使于临床,但是溶菌酶必将越来越引起人们的重视,特别是其广布于人体,在医药、科研方面的作用尤为重要.

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输血能够迅速的补充血容量，纠正休克，增强机体供氧能力，增强抗病力，对抢救动物的生命有重要意义。然而，输血不当时，往往会引起不良反应，甚至危及动物生命。因此只有切实掌握了输血的规律，正确实施才能够达到预期的效果。

随着社会的发展，宠物已经成为家庭中不可或缺的部分，为了更好的拯救他们于危难之中，作为从业人员必须掌握配血与输血。

输血的适应症

1、输血疗法可适用于各种原因引起的贫血；

2、车祸、手术、外伤等引发的大失血；

3、剧烈呕吐、腹泻引起的血容量降低；

4、各种原因引起的休克；

5、血小板和凝血因子缺乏引起的凝血不良；

6、白细胞减少症和低蛋白血症等病症。

7、烧伤时，输血可有效预防休克；

输血的作用

1、输血可以起到迅速补充循环血量、维持一定的血压、增加血液的凝固性和血红蛋白的浓度、增加血液运输氧的能力以及刺激机体的造血机能、防止休克等作用。

2、另外对供血者采取相应的免疫后，其血制品对犬细小病毒、犬瘟热可产生特异性的抗病力。

配血试验

在临床上，输血前为了保证安全，应做配血试验，根据要求和实验室条件以分为交差配血和简易配血法。在配血之前我们还应掌握以下内容：

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广东医学院设计性实验报告

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A1题型

1、下列细菌中，哪一种为革兰氏阴性球菌

A、 草绿色链球菌

B、 肺炎球菌

C、 化脓链球菌

D、卡他莫拉菌

E、 肠球菌

正确答案 D

2、目前，b型流感嗜血杆菌菌苗主要成分为

A、 荚膜多糖菌苗

B、 荚膜多糖-载体蛋白菌苗

C、 荚膜寡糖-变异型白喉类毒素结合菌苗

D、荚膜多糖-变异型白喉类毒素结合菌苗

E、 荚膜寡糖菌苗

正确答案 C

3、下列说法何者正确

A、 肺炎支原体不能通过滤器

B、 肺炎衣原体能通过滤器

C、 肺炎支原体有细胞壁结构

D、肺炎衣原体有DNA和RNA两种核酸

E、 肺炎衣原体只有DNA

正确答案 D

4、军团病的多次暴发，大多数与下列何种因素有联系

A、 环境污染

B、 空调系统的冷却塔水污染

C、 自来水管道污染

D、淋浴器污染

E、 临床呼吸机的使用

正确答案 B

5、淋病奈瑟菌生化反应不具有以下何种特征

A、 发酵葡萄糖

B、 产酸不产气

C、 不发酵蔗糖

D、发酵麦芽糖

E、 氧化酶试验阳性

答案 D

6、下列哪一项不是小肠结肠炎耶尔森菌的特征

A、 25℃培养时动力阳性

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