细胞生物学实验报告
一. 实验名称:细胞凝集反应
二. 实验原理:
细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构,脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为:细胞间的联系,细胞的生长和分化,免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。
凝集素(lectin)是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
凝集素是指一种从各种植物,无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白,因其能凝集红血球(含血型物质),故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA),通常以其被提取的植物命名,如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等,凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物,它们具有的某些“亲合”特性,能被免疫细胞化学技术方法所应用。
血型鉴别实验,也是凝集反应的一种。
三. 实验用品:
土豆块茎
显微镜,粗天平,载玻片,滴管2支,离心管2支
PBS缓冲液:称取NaCl7.2g,Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水,定容至1000ml,调pH值到7.2.
4.2%的红细胞
四. 实验步骤:
1. 称取土豆去皮块茎2g,加10mlPBS缓冲液,浸泡2h,浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。
2. 以无菌方法抽取兔子静脉血液(加抗凝剂),加生理盐水3ml,在1000r/min,离心5min,重复3次离心,最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。
3. 分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴,置双凹片左孔内,充分混匀。
4. 同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴,置双凹片右孔内,充分混匀,做对照实验。
5. 摇晃5—10min后,观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。
五. 实验结果:
图左为PBS缓冲液对照 图右为土豆凝集素
图一 图二 土豆凝集素(*4)
图一中为在振荡了11min后,细胞凝集的现象,中间凝结成血块,周围叫澄清,边缘为干涸的红细胞凝结成的颗粒附着在玻片上。在低倍镜(*4)下观察,可以看到红细胞凝结成块状,周围液体近乎透明,说明红细胞发生了凝集。
图三 图四 PBS缓冲液(*4)
图三中为在振荡了之后,红细胞并没有聚集成颗粒状,只是由于向心力左右而聚拢在一起呈透明凝胶状。在低倍镜(*4)下观察可见到均匀的透明液体,没有红细胞凝结而成的颗粒。
六. 实验分析:
实验所得结果可见,红细胞并没有如预期那般在中央凝结成大血块,而周围近乎透明,分析其原因可能为:
(1) 在滴加土豆凝集素时,没有加入半滴,而是加入了一滴,反而导致了细胞凝集效果下降。
(2) 在晃动过程中,速度过慢,且晃晃停停,导致红细胞凝结成的颗粒状在玻片上凝固。
(3) 血浆浓度的影响,血浆浓度不合适导致细胞凝集作用减弱。
细胞凝集反应的实验原理和方法
实验原理
细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构,脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为:细胞间的联系,细胞的生长和分化,免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。
凝集素(lectin)是一类含糖的(少数例外)并能与糖等专一性结合的蛋白质,它具有凝集细胞刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成桥的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
实验用品
1、土豆块茎。
2、显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。
3、PBS缓冲液
称取NaC 17.2g、Na2HP04 1.48g、KH2PO40.43g、加蒸馏水,定容至1000ml调pH值到7.2。 4、2%的红细胞。
以无菌方法抽取兔子静脉血液(加抗凝剂),用生理盐水洗5次,每次2000r/min,离心5min,最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。
实验方法
称取土豆去皮块茎2g,加10ml PBS缓液,漫泡2h,浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集索。 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴,置载玻片上,充分混匀,静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。
以PBS液加2%血细胞液作对照实验。
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