实验五   水中细菌总数的测定

实验目的

l.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2.了解水源水的平板菌落计数的原则。

基本原理
    本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
实验器材
    l.培养基   肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。
    2.仪器或其他用具   灭菌三角烧瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管等。
操作步骤
    l.自来水水样的采取：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
    2.自来水细菌总数测定
①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。
②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。
④培养基凝固后，倒置于37℃ 温箱中，培养24h，进行菌落计数。
⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。

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水中细菌总数的检测

1.     实验目的

1、学习并掌握水的细菌学检测方法

2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

2.     菌落总数standard plate-count bacteria

水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

3.     培养基与试剂

2.1 营养琼脂成分

2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经103.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4.     仪器和材料

4.1              仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。

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微生物综合实验  水中细菌总数的测定

一、实验目的

1．学习水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。

2．了解和掌握平板菌落计数的原则。

3．复习、巩固微生物实验的各单元操作。

二、实验原理

水中细菌总数的测定是进行水质检验的必要项目之一，主要作为判定饮用水、水源水、地表水等被污染程度的标志。

本试验采用平板菌落计数技术来测定水中的细菌总数。该法是根据在固体培养基上所形成的菌落来进行计数。菌落总数是指在一定条件下，1 mL水样所生长出来的细菌菌落的总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基和在一种条件下，使水中的所有细菌均能生长繁殖，因此，这种方法所得到的结果只是一种近似值。目前一般采用营养琼脂培养基，在需氧条件下，37℃培养36-48 h，所得到的细菌绝大部分是腐生性的嗜中温性需氧菌和兼性厌氧菌。

三、实验材料

1．检样：矿泉水等饮用水、河水、湖水、井水等。

2．培养基：营养琼脂培养基（附录Ⅱ-1.3）

3．仪器与其它用具：三角烧瓶，广口瓶，吸管，培养皿，试管，培养箱等。

四、实验步骤

1. 水样的采集与处理

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实验六 水中细菌总数和大肠菌群的检测

摘 要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。

关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养

前言

各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。

特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。

多管发酵法

初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气；

分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落； 复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。

材料和方法

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定

牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5.0 g，琼脂8g， 蒸馏水1000ml； pH 7.0

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福建医科大学人工湖水体中

——细菌总数及大肠菌群数的检测实验方案

实验组员：陈秋香、陈志明、林玲、李淋、管修标

一、  实验目的

    1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

　　2．了解水的平板菌落计数的原则。

    3.掌握测定水中大肠菌群数量的多管发酵法的原理、操作步骤及方法；

4.了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的重要性。

二、实验原理

A．水中的细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高，水体被污染的程度越重。

水中细菌的种属繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。

肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。

B. 总大肠菌群是以E.coli为代表的杆状、无芽胞、需氧或兼性厌氧、革兰氏阴性，经37℃、24～48h培养，发酵乳糖产酸产CO2可区别于其他肠道菌，易于测定的一类细菌。大肠菌群主要包括埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和柠檬酸杆菌属。这类菌是温血动物肠道中的正常菌群，常随动物的粪便污染水源，一个成年人每天排出的粪便中含有（5-100）×1010个这类细菌，并且它们与水中存在的肠道病原菌呈正相关性，而病原菌在水中的浓度很低，测定手续繁琐，工作人员还有被感染传播的危险。因此，总大肠菌群是一个合适的指示菌，能指示出病原菌在水中的存在，其数量大于或等于病原菌的数量，并且比病原菌容易检出，所以检测水的细菌学卫生标准，通常检测总大肠菌群。

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实验五 水中细菌总数的检测

一、   实验目的

1.      采用标准平皿法对水样中细菌作计数。

2. 掌握微生物实验中无菌操作技术方法。

二、   实验原理

     水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。

    试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h培养后所生长的菌落数。一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。

三、材料和器皿

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实验八 水中菌落总数的测定及染色观察

一、实验目的

掌握国标中关于水中细菌总数的测定基本原理和方法；熟悉水体中细菌总数的检验方法、检验原理、检验依据、数据处理和报告方法。

二、实验原理

本实验应用平板计数技术测定污水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

三、实验试剂与器材

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水；

灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，培养箱等。

四、实验步骤

(1) 水样的准备

河水，已采集。

(2) 细菌总数测定

[1]. 稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9 ml灭菌水内，摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第五管，稀释度分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30—300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。

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