细胞生物学实验报告

脂类细胞化学（苏丹Ⅲ染色法）

1. 实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法。

2. 实验用品：

（1） 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴

管

（2） 实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液

（3） 实验材料：小鼠

3. 实验原理： （1） 由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。类脂包括磷脂(phospholipids)，糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三类。而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。这几种脂类化学结构有很大差异，生理功能各不相同。其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。

（2） 在固定细胞时，通常使用脂溶性固定液。然而，鉴定的材料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。最好的固定材料是甲醛类的固定液。如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液，本次实验采用的则是甲醛钙溶液。

（3） 光学显微镜的切片多是石蜡切片。在熔接石蜡时，需要用到脂溶性溶剂，而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪，因此本次实验不可采用石蜡切片。但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以采用石蜡切片。

（4） 制作切片有多种方法，如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。

（5） 脂类染色的原理是，染料溶于脂类显色。选择溶剂时应注意，溶剂必须既溶解的染料，又不溶解掉脂类。

4. 实验步骤：

（1） 用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，用镊子提起小肠，使盖玻

片紧贴于肠系膜。用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定15分钟,

（2） 吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗，用滴管不断吸取液体以去除固定

液。

（3） 用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤，进行冲洗。

（4） 用苏丹Ⅲ染液染色30mins。

染色结束时，用吸水纸吸去多余染液。擦净盖玻片周边及表面，用显微镜

观察。

5. 实验结果：脂肪细胞被苏丹Ⅲ染液染成橘红色。细胞周围有溢出的脂肪粒，呈圆形，橘

红色。 （5）

10*4显微镜下观察： 10*10显微镜下观察：

10*40显微镜下观察：

6. 分析与讨论

（1） 结果分析：脂肪细胞中含有大量脂肪，脂肪被苏丹Ⅲ染液染成橘红色，因

而使整个细胞呈现橘红色。某些脂肪细胞破裂，而使脂肪溢出，呈橘红色

的圆球状。

（2） 注意事项

① 在用盖玻片贴肠系膜：由于小鼠的肠系膜很小，因而应该提前缩小盖玻片的尺

寸。可以用剪刀剪或用手掰小，并尽量使最后的盖玻片呈正方形。

② 肠系膜的选择：肠系膜是一层包裹在小肠外的很细的薄膜，这层膜的大部分地

方是没有脂肪细胞的。但是，肠系膜血管的周围有一些起保护作用的脂肪细胞。

因此，选材时应注意选择含有血管的肠系膜。但是有一些血管周围的脂肪细胞

非常厚，肉眼可见呈白色。这样的地方是无法观察的，所以选材时还要注意材

料的透明度。

③ 染色：染色过程为30mins，在这一过程中，染料中的水分很有可能蒸发，因此

在染色过程中应不时向载玻片中滴加染料。

④ 观察：在把物镜由10倍转为40倍时，应考虑到物镜变长，可能会使镜面蹭到

小鼠的小肠。在观察时可先将小肠切除，只观察肠系膜。

⑤ 观察：观察时如果血管呈红色，是由于放血时没有放干净，下次实验应该注意 （3） 作业：糖类的鉴定

Molisch反应（α- 萘酚反应）：此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用，形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α- 萘酚一样。除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。

此反应不能鉴别多聚糖如淀粉，纤维素等。

Benedict反应：班氏试剂是斐林试剂的改良（也是含有Cu2+的碱性溶液），能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化，其本身则变成砖红色或黄色的Cu2O，可用来测定还原糖的存在。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比斐林试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。

Bial反应（甲基间苯二酚反应）：戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在的条件下，它与甲基间苯二酚（地衣酚）缩合，形成深蓝色的沉淀物（此沉淀物溶于正丁醇）。己糖也能发生反应，产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。

Molisch反应（α- 萘酚反应）： 此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用，形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α- 萘酚一样。除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。

Seliwanoff反应：同样的原理，将糖与浓酸作用后再与间苯二酚反应，若是酮糖就显鲜红色，若是醛糖就显淡红色，由此可鉴别酮糖和醛糖。

蒽酮反应：糖类经浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）反应生成蓝绿色复合物。

Barfoed test ： 检验单糖的一种试验。将5ml的Barfoed试剂煮沸，在保持其沸腾情况下缓慢地加入待检物。单糖还原比混合物，形成红色沉淀物；而双糖虽亦能还原，但反应甚慢，可与前者区别。

脂肪的鉴定：脂肪可用 苏丹Ⅲ染液、苏丹Ⅳ染液、油红染色进行鉴定

蛋白质的鉴定：常用的试剂是双缩脲试剂。其原理是：碱性条件下，双缩脲H2N-CO-NH-CO-NH2可以和Cu离子作用生成紫色沉淀。蛋白质中有很多和双缩脲结构相似的肽键，所以可以用双缩脲试剂来鉴定蛋白质。

 

第二篇：4.苏丹三染色

【实验目的】

1.  掌握断头法杀死小鼠以及基本解剖方法。

2.  了解脂类细胞化学及苏丹Ⅲ染色法。

3.  初步掌握苏丹Ⅲ染色法基本操作及小鼠解剖操作。

4.  初步了解小鼠解剖结构。

【实验原理】脂类包括的范围很广，有单纯脂、复合脂、衍生脂等，脂肪依其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、磷脂以及其他类脂质。通常，各种脂与类脂质在体内不是单独存在，是以某种程度混合存在。

此外，脂肪与类脂质和蛋白质结合时，往往不易显出，但用重铬酸钾、升汞、硝酸锗或硝酸铀氧化组织块或切片，可以显现出脂肪及类脂类。脂类不溶于水，易溶于酒精、苯、乙醚、氯仿。因此脂肪标本的制作，需用不含酒精或不能溶脂的液体固定，一般常用甲醛类固定剂。

用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似液体，可用于石蜡切片。但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：

      冰冻切片

      明胶包埋冰冻切片

      铺片法

【实验材料】小白鼠；苏丹Ⅲ染色剂、甲醛钙溶液、蒸馏水、乙醇；盖玻片、载玻片、解剖剪、镊子。

【实验步骤】

1.  断头法杀死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠，尽量将肠系膜展开，铺于载玻片上，并加盖盖玻片。用剪将肠系膜连同盖玻片一同取下。

2.  在盖玻片一侧滴加甲醛钙溶液的载玻片上，在另一侧用吸水纸吸引，使肠系膜浸润于溶液中，固定20min。

3.  吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。

4.  用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。

5.  用苏丹Ⅲ染色30min。

6.  吸去溢出染液，擦净盖玻片表面，置于显微镜下观察。

【实验结果】

  

【实验结果分析与注意事项】

分析：1.细胞染色较浅，可能染色时间不充分，或肠系膜展开不充分。

      2.细胞重叠较多。

注意：1.保持肠系膜浸润于染液中。

      2.将肠系膜尽量展开。