细胞生物学实验报告

细胞死活鉴定

1. 实验目的：观察上次实验培养的小鼠脾细胞，掌握细胞死活鉴定的方法。

2. 实验用品：

（1） 仪器及器材：显微镜、血细胞鉴定板、盖玻片、胶头滴管、试管

（2）

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3. 实验原理： （1） 活细胞特征：细胞边缘清晰，细胞透明度高，整体立体感强，核区域明显，细胞质内颗粒物质较少，无空泡。培养数天后，可观察到正在分裂的细胞。

（2） 肉眼观察鉴定细胞死活：正常生长的细胞培养液微微发黄，透明度高；如发现培养液微混，则说明细胞量太大需进行传代培养，或者培养液被污染；如果培养液仍呈现清亮的粉红色，则说明细胞未生长。

（3） 细胞凋亡特征过程：首先，细胞膜绒毛消失；然后，细胞收缩，细胞核高度浓缩，边缘化；最后，细胞核片段化，形成凋亡小体。细胞核片段化时，如果对此类细胞进行DNA电泳，则会发现电泳条带呈梯状分布。

（4） 细胞死活鉴定方法 实验药品：蒸馏水、台盼蓝染液、生理盐水、伊红染液 实验材料：小鼠脾细胞

① 染色排除法：细胞死亡后，细胞膜的通透性变大，染料可以通过细胞膜进入细胞。因此，死细胞可以被染料染色，而活细胞由于细胞膜的选择透过性而呈无色。

② 荧光染色法：活细胞需要进行代谢。将荧光染料与有机分子结合（如二丙酸酯荧光素），使之易穿膜。在活细胞中这些物质可被分解为荧光染料和有机分子（二丙酸酯和荧光素），在显微镜下观察，细胞被染色。此种方法中，活细胞被染色，死细胞则呈无色。

（5） 血细胞计数板的用法：如果是对比较密的细胞进行计数（如红细胞），则使用中间的中格进行计数，再将所得数值乘以2500，即是每毫升中的细胞数量；如果是对比较稀疏的细胞进行计数（如白细胞），则使用四个角上的大格进行计数，再将所得数值乘以10000，即是每毫升中的细胞数量。

4. 实验步骤：

（1） 台盼蓝染色法：

① 用生理盐水制成0.4%的台盼蓝溶液备用

② 取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加一滴染液，混合。2 mins 后迅速制

（2） 成临时装片，镜检。 伊红丫染色法

① 用生理盐水制成0.15%的伊红染液混合

② 2 mins 后制片镜检

5. 实验结果：视野中活细胞呈无色；死细胞呈蓝色，有些可观察到细胞核；还有少量细胞只有边缘部分呈蓝色。

10*10显微镜下观察： 10*40显微镜下观察：

6. 分析与讨论

（1） 结果分析：视野中活细胞未被染色而呈无色；死细胞由于细胞膜通透性变

大而被染色，呈蓝色，细胞核被染色，所以有些可观察到细胞核。还有少

量细胞只有边缘部分呈蓝色，这是可能是由于染色时间过长，细胞离开恒

温环境而死亡，慢慢被染成蓝色。

注意事项 （2）

① 用显微镜观察时：由于血细胞鉴定板的网格线比较难以观察，应该事先将光圈

调为小光圈，同时光线尽量调暗，使网格线清晰。

② 观察：在制成临时装片后，应迅速镜检。因为细胞从恒温（37℃）环境转移到

室温 环境后，会迅速死亡，如不迅速观察，很难观察到活细胞。 ③ 血细胞计数板的用法：如果是对比较密的细胞进行计数（如红细胞），则使用

中间的中格进行计数，再将所得数值乘以2500，即是每毫升中的细胞数量；如果是对比较稀疏的细胞进行计数（如白细胞），则使用四个角上的大格进行计数，再将所得数值乘以10000，即是每毫升中的细胞数量。选择合适的计数方法，会取得事半功倍的效果。

 

第二篇：植物细胞的活体染色和死活的鉴定

植物细胞的活体染色和死活的鉴定

一、目的

练习以碱性染料中性红进行活体染色的方法。通过活体染色及质壁分离，进行细胞死活的鉴定。

二、原理

用某种对植物无害的染料稀溶液对活细胞进行染色称活体染色。中性红是常用的活体染之一。在中性或微碱性环境下，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡排泄，液泡一般呈酸性，进入液泡的中性红解离出大量阳离子而呈樱桃红色, 原生质及壁不染色。死细胞的液泡消失因而不产生液泡着色现象，中性红阳离子却与带一定负电荷的原生质及细胞核结合而使生质及细胞核染色。成熟植物的细胞是一个渗透系统，活的原生质具有选择透性，原生质内部包含着一个大液泡，具有一定的溶质势。当细胞与外界低水势溶液接触时，细胞内的水分外渗，原生质随着液泡一起收缩而发生质壁分离；其后，当与清水（或高水势溶液）接触，细胞又因液泡的吸水膨胀而发生质壁分离复原。死细胞因其原生质的选择透性已遭破坏，故与低水势溶液接触时不产生质壁分离。

三、材料、仪器设备及试剂

1.材料：洋葱鳞茎；玉葱鳞茎。

2.仪器设备：刀片；镊子；吸水纸；酒精灯；载玻片；盖玻片；胶头滴管；显微镜。

3.试剂：0.8mol/L蔗糖液；0.03％中性红溶液。

四、实验步骤

1.制片染色

用尖头镊子撕取洋葱（玉葱）鳞片内表皮薄片，浸到0.03％中性红溶液中10～15min 进行染色。

2.观察

2.1将染色后的植物材料放到载玻片上，盖好盖玻片，在盖玻片的一侧滴加无离子水（或pH略高于7.0的自来水），另一侧放吸水纸吸干，以洗净撕片外粘附的中性红溶液，然后在显微镜下观察，可以看出液泡染成樱桃红色；原生质层（细胞质和细胞）则无色透明紧贴细胞壁（在细胞的角隅上可以看见）。

2.2 在第1项观察后，接着从盖玻片的一边滴2滴0.8mol/L

蔗糖液在盖玻片的另一边用吸水纸吸盖玻片下的水，将蔗糖液引入盖玻片下浸渍植物材料，并立即镜检，可以看到细胞很快发生质壁分离。先是凹形质壁分离，而后变为凸形质壁分离。

2.3在第2项观察后，接着在盖玻片的一边加入2～3滴无离子水，在另一边用吸水纸吸去糖液，将无离子水引入盖玻片底，立即镜检可以看到带有液泡的原生质体重新吸水膨大，最后充满整个细胞腔，即质壁分离复原（复原缓慢进行时，细胞仍可正常存活；如果进行很快，则会因原生质机械破坏而死亡）。

2.4将一片经中性红染色的植物材料放在载玻片上，加一滴无离子水后加盖玻片，在酒精灯火焰上微微加热，然后在显微镜下观察，可以看到细胞质凝结成不均匀的凝胶状，与细胞核一起染成红色。然后按(2.2)法加0.8mol/L蔗糖液也不发生质壁分离。