生物化学实验常用试剂、缓冲溶液的配制方法

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1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 □组份浓度 0.5mol/L

□配制量 2L

□配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。

2.用去离子水溶解并稀释至2L。

2、0.5mol/L盐酸溶液 □组份浓度 0.5mol/L

□配制量 2L

□配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。

2.用去离子水稀释至2L。

4、0.2％葡萄糖标准溶液 □组份浓度 0.2％

□配制量 1L

□配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。

2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。

3.准确称取葡萄糖2.000g。

4.用去离子水溶解并定容至1L

5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清 □组份浓度 250μg/mL

白蛋白标准液 □配制量 2L

□配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。

3.4℃保存。

6、Folin试剂甲

□配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中，

加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。

2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中，

加入0.25g硫酸铜?5水，溶解。

3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。

4. 4℃保存，可用一周。

7、Folin试剂乙

□配置方法

1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g，

钼酸钠?2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，

浓盐酸25mL，充分混合。

2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。

3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。

4.于棕色瓶中保存，可使用多年

注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。

8、DNS试剂

□配置方法 1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 （3，5-二硝基水杨酸试剂）

2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。

3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。

9、5％蔗糖溶液 □组份浓度 5％

□配制量 1L

□配置方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。

10、0.1mol/L蔗糖溶液 □组份浓度 0.1mol/L

□配制量 1L

□配置方法 称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。 11、20％乙酸溶液 □组份浓度 20％

□配制量 1.2L

□配置方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。

12、30％（W/V）Acrylamide

□组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％

□配制量 1L

□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Acrylamide 290g

BIS 10g

2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解

3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，

其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无

毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

13、40％（W/V）Acrylamide

□组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％

□配制量 1L

□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Acrylamide 380g

BIS 20g

2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解

3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 14、10％（W/V）过硫酸铵

□组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵

□配制量 10mL

□配置方法 1.称取1g过硫酸铵。

2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。

3.贮存于4℃。

注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，

超过期限会失去催化作用。

15、考马斯亮蓝R-250染色液

□组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇， 10％（V/V）冰醋酸 □配制量 1L

□配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。

2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。

3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。

4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。

5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。

16、考马斯亮蓝染色脱色液

□组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇

□配制量 1L

□配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

醋酸 100mL

乙醇 50mL

dH2O 850mL

2.充分混合后使用。

17、凝胶固定液

□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸

(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 100L

□配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

甲醇 500mL

醋酸 100mL

dH2O 400mL

2.均匀混合后室温保存。

18、凝胶处理液

□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛

(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L

□配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

甲醇 50mL

戊二醛 10mL

dH2O 40mL

2. 均匀混合后室温保存。

19、凝胶染色液

□组份浓度 0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水，

(SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠

□配制量 100L

□配置方法 1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。 20％硝酸银 2mL

浓氨水 1mL

4％氢氧化钠 1mL

dH2O 96mL

2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液

会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。

3.本染色液应现用现配，不宜保存。

20、显影液

□组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛

(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L

□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。 柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL

2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。

3.室温保存。

21、45％乙醇溶液 □组份浓度 45％

□配制量 1L

□配置方法 量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。 22、5％的十二烷基硫酸钠溶液 □组份浓度 5％

（W/V） □配制量 0.1L

配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。

23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂

配置方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。 24、1.6％乙醛溶液 □组份浓度 1.6％

□配制量 0.1L

□配置方法 取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。

25、二苯胺试剂

□配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，

2.再加入8mL高氯酸混匀。

3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。

注意：配制完成后试剂应为无色。

26、15％三氯乙酸溶液 □组份浓度 15％

□配制量 2L

□配置方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。 27、1％谷氨酸溶液 □组份浓度 1％

□配制量 0.5L

□配置方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。

2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。

3. 最后用去离子水定容至0.5L。

28、1％丙酮酸溶液 □组份浓度 1％

□配制量 0.5L

□配置方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。

2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。

3. 最后用去离子水定容至0.5L。

29、0.1％的碳酸氢钾溶液 □组份浓度 0.1％

□配制量 0.5L

□配置方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。 30、0.05％的碘乙酸溶液 □组份浓度 0.05％

□配制量 0.25L

□配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。

31、Locke氏溶液 □配制量 2L

配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸

氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。

32、0.2mol/L的丁酸溶液 □组份浓度 0.2mol/L

□配制量 1L

□配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。

2.用1mol/L的氢氧化钠中和。

3.再用去离子水定容至1L。

33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L

□配制量 10L

□配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。

34、0.1mol/L的碘溶液 □组份浓度 0.1mol/L

□配制量 1L

□配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。

2.用去离子水溶解并定容至1L。

3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。

35、10％氢氧化钠溶液 □组份浓度 10％

□配制量 2L

□配置方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。

36、10％盐酸溶液 □组份浓度 10％

□配制量 0.2L

□配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。

37、0.1％标准丙氨酸溶液 □组份浓度 0.1％

□配制量 0.5L

□配置方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。

38、0.1％标准谷氨酸溶液 □组份浓度 0.1％

□配制量 0.5L

□配置方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。

39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1％

□配制量 1L

□配置方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。

40、酚溶液

□配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。

41、0.5％淀粉溶液 □组份浓度 0.5％

□配制量 0.1L

□配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。

42、对羟基联苯试剂

配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中，

配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮

或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。

1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液 □组份浓度 0.2mol/L

（pH 6.0） □配制量 1L

□配置方法 1. 称取磷酸氢二钠?12水 8.82 g。

2. 称取磷酸二氢钠?2水 27.34g。

3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。

2、洗脱液 □组份浓度 0.15mol/L

（含0.15mol/L氯 □配制量 10L

化钠的0.005mol/L □配置方法 1.称取氯化钠87.66g。

pH 6.0的磷酸缓冲液） 2. 用0.2mol/L pH6.0的

磷酸缓冲液250mL溶解。

3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。

3、0.3mol/L磷酸缓冲液 □组份浓度 0.3mol/L

（pH7.8） □配制量 0.5L

□配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠?12水49.150g。

2.磷酸二氢钠?2水2.000g。

3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。

4、0.2mol/L乙酸缓冲液 □组份浓度 0.2mol/L

（pH4.6） □配制量 2L

□配置方法 1.准确称取乙酸钠?3水54.44g。

2. 加入23mL冰乙酸，溶解。

3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。

5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸 □组份浓度 0.2mol/L

缓冲液 □配制量 各1L

（pH 2.6、4.6、6.6）

□配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4?12水143.256g， 用去离子水定容至2L。

2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸?1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。

3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：

pH值 A（mL） B（mL）

2.6 109.0 891.0

4.6 467.5 532.5

6.6 727.5 272.5

4. 按上表混匀后，4℃保存。

6、20×SSC 缓冲液 □配制量 1L

（pH7.0） □配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。

2.准确称取88.2g柠檬酸钠?2水。

3.溶解于800mL去离子水中。

4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

5.加去离子水定容至1L。

注意：按实验需要可分装后高压灭菌。

10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L氯化钠- □组份浓度 0.15mol/L

乙二胺四乙酸二钠 □配制量 1L

缓冲液 □配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。

（pH8.0） 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。

3. 溶于800mL去离子水中。

4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。

5.加去离子水定容至1L。

8、1/15mol/L的磷酸盐 □组份浓度 0.15mol/L

缓冲液 □配制量 1L

（pH7.6）

□配置方法

1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。

2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4? 2水11.876g（或磷酸氢二钠?12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。

3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。

9、5×Tris-GlycineBuffer □组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS （SDS-PAGE电泳缓冲液） □配制量 1L

□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tris 15.1g

Glycine 94g

SDS 5.0g

2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10、5×SDS-PAGE □组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8）

Loading Buffer％（W/V） 10 SDS

0.5％（W/V） BPB

50％（V/V） 甘油

5％（W/V） β-巯基乙醇

□配制量 5mL

□配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1M Tris-HCl 1.25mL

SDS 0.5g

BPB 25mg

甘油 2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右