实验九 脂肪酸β-氧化

目的要求：

（1）了解脂肪酸的β-氧化作用。

(2) 掌握测定β-氧化作用的方法和原理。

实验原理:

在肝脏中，脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。

本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式如下：

2NaOH +I2 ─→NaOI +NaI +H2O

CH3COCH3 +3NaOI ─→CHI3（碘仿）+CH3COONa +2NaOH

剩余的碘，可以用标准硫代硫酸钠滴定。

NaOI +NaI +2HCl ─→I2 +2NaCl +2H2O

I2 +2Na2S2O3 ─→Na2S4O6 +2NaI

根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。

试剂和器材

一、试剂

0.1%淀粉溶液；0.9%氯化钠溶液； 15%三氯乙酸溶液；10%氢氧化钠溶液。 10％盐酸溶液：浓盐酸一般浓度35%~37%，取浓盐酸277.8 mL定容到1000 mL。 0.5mol/L丁酸溶液：取5 mL丁酸溶于100 mL0.5mol/L氢氧化钠溶液中。

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实验28  脂肪酸的β一氧化

一、目的

1．了解脂肪酸的β一氧化作用

2  通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β一氧化作用的方法及其原理。

二、原理

在肝脏内脂肪酸经 β一氧化的作用生成乙酰辅酶A，两分子的乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成 β一羟丁酸。 乙酰乙酸，β一羟丁酸和丙酮总称为酮体。肝脏不能利用酮体，必须经血液运至肝外组织特别是肌肉和肾脏，再转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。酮体作为有机体代谢的中间产物，在正常的情况下，其产量甚微，患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。

本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应滴定。在碱性条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下：

2HaOH+I₂===NaOI+NaI+H₂O

CH₃COCH₃+3NaOI===CHI₃+CH₃COONa+2NaOH

碘仿

剩余的碘可用标准Na₂S₂O₃滴定

NaOI+NaI+2HCl===I₂+2NaCl+H₂O

I₂+2Na₂S₂O₃===Na₂S₄O₆+2NaI

根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。

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细胞生物学实验报告

脂类细胞化学（苏丹Ⅲ染色法）

1. 实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法。

2. 实验用品：

（1） 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴

管

（2） 实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液

（3） 实验材料：小鼠

3. 实验原理： （1） 由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。类脂包括磷脂(phospholipids)，糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三类。而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。这几种脂类化学结构有很大差异，生理功能各不相同。其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。

（2） 在固定细胞时，通常使用脂溶性固定液。然而，鉴定的材料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。最好的固定材料是甲醛类的固定液。如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液，本次实验采用的则是甲醛钙溶液。

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1.什么是酮体？本实验如何计算样品中丙酮的含量？

答：在肝脏中，脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸A、β-羟基丁酸及丙酮，三者统称为酮体。肝脏具有较强的合成酮体的酶系，但却缺乏利用酮体的酶系。 酮体是脂肪分解的产物，而不是高血糖的产物。本实验是根据反应： 2NaOH+I2 NaOI+H2O+NaI CH3COCH33+CH3COONa+2NaOH 而剩余I2 可用标准硫代硫酸钠滴定：

I2+2NaCl+H2O I2+2Na2S2O3Na2S4O6+2NaI

根据滴定的样品和滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算出由丁酸氧化生成的丙酮量。

2.为什么可以通过测丙酮的量来推算出细胞脂肪酸β氧化作用的强弱？

答：脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A。二分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可以还原生成β-羟丁酸。而本实验是脂肪酸的氧化作用，因此绝大部分的乙酰乙酸都氧化生成了丙酮，故可以用通过测丙酮量来推算其氧化强弱。

3.本实验为什么选用肝组织，选用其它组织是否可以，为什么？

答：是因为脂肪酸β-氧化只是发生在肝脏中，而其他组织中发生的很少或几乎不发生脂肪酸β-氧化，因此只能选取肝组织，而不能选其他组织.

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计算脂肪酸氧化的能量

（四）脂肪酸氧化的能量计算

1分子软脂酸（16C）经7次β-氧化可生成8个乙酰CoA、7个NADH+H+、7个FADH2。每个乙酰CoA进入TCA循环生成3个NADH+H+、1个FADH2、1个GTP，并释放2分子CO2。

总反应方程式是：软脂酰CoA+23 O2+131Pi+131ADP→CoASH+16 CO2+123H2O+131ATP

净生成的ATP数：12×8＋3×7＋2×7－2 =129。 (脂肪酸活化消耗2个高能磷酸键，相当消耗2个ATP) 当以脂肪为能源时，生物体还获得大量的水。骆驼的驼峰是储存脂的“仓库”，既提供能量，又提供所需的水。

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宁波大学科学技术学院实验报告

20##-2013学年第2学期

课程名称   植物基因图位克隆   

课程编号      EK5J13A00     

实验名称     手工皂的制作      

专    业       生物技术        

班    级      11生物技术      

学　  号       114177425       

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生物学实验教学中心

目    录

引言......................................................................................................... 1

1、          材料和方法...................................................................................2

1.1、  实验仪器.................................................................................2

1.2、  试剂及溶液.............................................................................2

1.3、  实验方法步骤.........................................................................5

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孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业：         学号：           姓名：          分数：

实验二  油脂酸价的测定

一、目的与要求

   初步掌握测定油脂酸价的原理和方法；了解测定油脂酸价的意义。   

 二、实验原理

   油脂在空气中暴露过久，部分油脂会被水解产生游离脂肪酸和醛等物质，并且这些物质具有刺激性气味，使油脂产生酸价。酸败的程度使以水解产生的游离脂肪酸的多少为指标的，常以酸价或者是酸值来表示。同一油脂若酸价高，则说明水解产生的游离脂肪酸就多。

酸价是指中和1g油脂中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数。酸价越高，油脂的质量也越差。

三、主要仪器、实验材料和试剂

1. 锥形瓶（250 mL）3个； 2. 量筒（50 mL）1支；3. 碱式滴定管1支；4. 花生油、菜油、芝麻油等；5. 乙醇-乙醚混合液(1:1,V/V)；6. 0.1 ％ KOH（1克KOH溶于1000 mL纯水中）。

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