实验三复方对乙酰氨基酚片的含量测定

一、目的要求

1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。

2、掌握复方片剂的分析特点。

二、基本原理

复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。

各成分之间性质差异大。乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K_a＝3.27×10^-4，可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K_b＝0.7×10^-14，不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。反应式表示如下：

1、乙酰水杨酸的测定原理

等当点时，由于生成物水杨酸钠的水解，溶液呈微碱性，所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。

2、对乙酰氨基酚的测定原理

3、咖啡因的测定原理

三、实验方法

取本品20片，精密称定，研细备用。 

（一）乙酰水杨酸的含量测定

药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219 g～0.242 g。

精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g），置分液漏斗中，加水15ml，摇匀，用氯仿振摇提取4次（20 ml，10 ml，10 ml，10ml），提取氯仿液用同一分水10ml洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L氢氧化钠液滴定，即得。每1ml 0.1mol/L氢氧化钠液相当于18.02mg的C₉H₈O₄。

按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数

     

其中：T－为滴定度；V－消耗滴定液体积；f-为滴定液浓度校正因子

（二）对乙酰氨基酚的含量测定

药典规定每片检品中含对乙酰氨基酚应为0.120 g～0.132 g。

精密称取上述细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚0.25 g），置锥形瓶中，加稀硫酸25 ml，缓缓加热回流60分钟，冷却至室温，将析出的水杨酸滤过，滤渣与锥形瓶用盐酸液(1→2)40ml，分数次洗涤，每次5m1，合并滤液与洗液，加溴化钾3g溶解后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，在不低于20℃的温度下，用0.lmol/L亚硝酸钠液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管尖端提出液面，用少量的水将尖端洗涤，洗液并入溶液中继续缓缓滴定，至用细玻棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾淀粉指示液的白瓷板上，即显蓝色的条痕，停止滴定，5分钟后再蘸取少许，划过一次，如仍显蓝色的条痕，即达终点。 每lml的0.l mol/L亚硝酸钠液相当于15.12mg的C₈H₉NO₂。    

按下式计算每片含对乙酰氨基酚的克数：

  式中：为亚硝酸钠液的实际浓度，0.1为亚硝酸钠液的理论浓度

 (三)咖啡因的含量测定

药典规定每片检品中含咖啡因应为27.0～31.5mg。

精密称取上述细粉适量(约相当于咖啡因50mg)，加稀硫酸5ml，振摇数分钟使咖啡因溶解，滤过，滤液置50ml容量瓶中，滤器与滤渣用水洗涤三次，每次5m1，合并滤液与洗液，精密加0.l mol/L 碘液25 m1，用水稀释至刻度，摇匀，在约25℃避光放置15分钟，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25m1置碘量瓶中，用0.05mol/L硫代硫酸钠液滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每lml的0.1 mol/L碘液相当于5.305 mg的C₈H₁₀N₄O₂·H₂O。

按下式计算每片含咖啡因的mg数

   

       

四、预习提要

1.采用三种方法分别测定乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚、咖啡因含量的原理及有关问题讨论。

2.测定乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚、咖啡因时，各自的取样量如何计算?

3.画出乙酰水杨酸提取及洗涤的装置草图。

4.画出对乙酰氨基酚水解回流的装置草图及滴定装置图。

5.测定乙酰水杨酸时，加入中性乙醇的作用是什么？如何配制?

6.测定乙酰水杨酸时，为什么要提取？

7.测定对乙酰氨基酚时，加入KBr的作用是什么?如何控制到达近终点的一次滴定量?

8.外指示剂指示终点的原理、方法及缺点。如何尽可能克服这一缺点？

9.咖啡因能否采用一般含氮碱的方法测定之，为什么?

10.咖啡因含量测定时，为什么要在滴定近终点时才加入淀粉指示液?过早加入会出现什么现象?如何掌握近终点?

11.测定过程中如何防止碘 (I₂)的挥发?

12.计算三成份测定时的滴定度。

13.请比较乙酰水杨酸的中国药典法即直接酸量法 (原料)和两步滴定法 (片剂)与本法提取酸量法的优缺点。

附:复方对乙酰氨基酚片处方

乙酚水杨酸           230 g

对乙酰氨基酚         126 g

咖啡因               30 g

制成                 1000片

实  验  指  导

复方对乙酰氨基酚片为一复方制剂。所谓复方制剂指含有二种或二种以上主成份的制剂。在分析复方制剂时，既应考虑赋形剂等附加成份的影响，又要考虑主成份之间的相互影响。复方对乙酰氨基酚片中含有三种主成份，乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因 。乙酰水杨酸为酸性，对乙酰氨基酚为中性，含潜在芳伯氨基，咖啡因为弱生物碱。由于性质差异大，可以采用酸量法、水解后重氮化法、碘量法分别测定三者的含量，相互之间互不干扰。通过本实验，应掌握复方制剂分析的特点及三种方法的原理和操作技能。

一、乙酰水杨酸的含量测定

(一)提取酸量法

乙酰水杨酸为酸性物质，采用酸量法测定时对乙酰氨基酚、咖啡因对它无干扰，但是处方中加入酒石酸或枸椽酸为稳定剂影响测定，故用氯仿提取以消除稳定剂的影响。

由于乙酰水杨酸易水解成水杨酸和醋酸，要多消耗氢氧化钠，所以应在中性乙醇中进行分析，并控制滴定温度在5~15℃，以防水解。

(二)操作要点与技能训练

本实验进一步加强提取分离的技能训练。

1.片剂的取样方法

(1)   取样量计算

(2)   粉末制备及称量

取15片或20片置称量纸或干燥洁净的小烧怀 (预先称重)里精密称重 (求得平均片重)，置研钵中研细，不允许有大颗粒存在。按取样量的±10%为范围精密称定粉末量。

2.定量提取

①检查分液漏斗并检漏

    在提取前，首先要检查分液漏斗，注意漏斗塞及活塞是否严密、配套，尤其要注意上口活塞边上有无放气的小孔。然后用少量提取溶剂振摇，检漏。活塞用甘油淀粉糊润滑，因为与活塞直接接触的是与水不溶的有机溶剂氯仿。

②振摇方法

    参见实验三有关内容。如有少量液体冲至漏斗玻管部分，应用少量氯仿冲洗使之回入漏斗中。如果上口活塞有放气孔，只需将两孔对齐即可放气，然后错开两孔，再轻轻旋摇或振摇。

③分层

将分液漏斗置分液漏斗架上，静置待分层后，打开玻塞 (或对齐上口小孔)，用少量水冲洗玻塞瓶口。旋转活塞，缓缓放出下层液至接收器中 (如下层液体需进一步用溶剂提取或洗涤时，可用另一分液漏斗接收之)。因尽量将两相恰好分离。分得的两相必要时可经过过滤或洗涤。

④提取次数及用量

提取4次，氯仿用量依次为20 m1, 10 m1, 10 m1, 10 m1。

⑤提取及洗涤方法

a. 提取－洗涤过程中，不能让水层长时间地接触活塞部分，以免甘油淀粉糊被溶解而发生渗漏。

b. 每次提取液都置第2只分液漏斗经同一份水洗涤，洗涤液收集入锥形瓶，并合并洗涤液。即经过四次提取，四次洗涤，然后将4次提取--洗涤液合并入同一锥形瓶中。

3.蒸除溶剂

在水浴上蒸馏回收，蒸馏所得氯仿液应收集于磨口锥形瓶中，不能敞口蒸馏或敞口接收馏液。

4.所加中性乙醇，是用酚酞为指示剂调配的。

5.滴定温度控制在5~15℃，终点粉红色应保持30秒不褪。

二、对乙酰氨基酚的含量测定

（一） 解释两个问题

l. 复方对乙酰氨基酚片粉的水解

对乙酰氨基酚、阿斯匹林在酸性中水解，生成的产物有对氨基酚（ ） 和水杨酸 （ ）,在酸性条件下，水杨酸不溶于水而沉淀析出。

2.加入KBr的作用

在盐酸条件下，重氮化反应过程为:

NaNO₂十HCl→HNO₂+NaCl

HNO₂十HCl→NOCl十H₂O

反应速度取决于慢反应的一步即第一步。根据质量作用定律，反应速度=K[Ar一NH₂]·[NO⁺]，亦即增大Ar一NH₂和NO⁺的浓度，都能加速反应。由于反应物是一个具斥电子基的化合物，所以使氮上电子云密度增大，碱性增强，成盐性增强，游离原形浓度下降，会使反应速度下降。为了加快反应速度，那么势必要增加另一个反应物NO⁺的浓度，为此在溶液中加入KBr，

KBr+HCl→HBr+KCl

HBr+HNO₂→NOBr+ H₂O

产生NOBr的平衡常数比产生NOCl的平衡常数要大300倍，亦即加入KBr后，溶液中NO⁺的浓度大大增加了，从而有效地增加了反应速度。

(二)操作要点及技能训练

1. 取样量计算  

2. 水解

水解完全是本实验的关键。如果水解不完全，轻者含量偏低，重者致使快速滴定失效。为确保水解完全，应在直火上(2000瓦电炉)加热回流40分钟，若用3000瓦以上的电炉，则应加石棉网，以免加热太猛烈使回流液冲出。

3. 滤过及滤渣洗涤

(1)在此条件下对乙酰氨基酚水解产物对氨基酚溶于稀硫酸中，而乙酰水杨酸的水解产物水杨酸不溶于酸而析出。将回流液放冷至室温或用自来水冲洗外瓶壁使之冷却，冷却过程中轻轻旋摇，以生成有利于过滤的大针形结晶。

(2)过滤时可采用上倾法过滤，即将上层液体置入漏斗，滤渣及锥形瓶用盐酸液 (1→2)40m1分数次洗涤，仍用上倾法过滤并将洗液并入滤液中，以免样品损失。

4.滴定

(1)       在200或250m1的烧杯中进行，烧怀置搅拌器上，在烧杯中加搅拌子一粒或二粒。

(2)       在酸式滴定管前加一小段滴管，用乳胶管连接。

(3)       按下限预先计算近终点加入量。

(4)       将滴定管尖端插入液面下约2/3处，不低于20℃的温度下，用0.lmol/L亚硝酸钠液迅速滴定，边滴边搅拌。当滴至按下限计理论量前1~2m1，即至近终点时，将滴定管尖端提出液面;并用少量水将尖端上的样液洗净并入。

(5)       此时，应缓缓滴定，逐滴滴入并不断搅拌，因为这个反应为分子反应，尤其是近终点时反应物浓度小，速度更慢。

(6)       在白瓷板上滴一滴碘化钾淀粉指示液，用细玻棒头蘸取反应液少许，划过指示液，如立即显蓝色，则应停止滴定，搅拌反应3分钟后，再试之，若仍显蓝色，即达终点，否则视为假终点，是由于局部浓度过浓引起的。这里还应强调显色要立即。过后显色不能算达终点。因为指示剂置于空气中一段时间后，空气将指示剂中KI氧化为I₂而使淀粉变蓝色。

(7)       外指示剂指示终点最大的缺点是样品易损失。为了减少这一损失，可预先做一份求得大概含量，然后再准确测定，另外蘸取试验时取量一定要少。

三、咖啡因含量测定的操作要点及注意事项

1. 取样量计算      

2. 加稀硫酸溶解咖啡因，但乙酰水杨酸、非那西丁、滑石粉等不溶。搅拌5~6分钟以控制咖啡因的溶解程度。

3. 定量过滤并转移是本法的关键。

4. 标准碘液和咖啡因的反应可置于暗处进行，时间为15分钟左右。

5. 剩余碘溶液的量取

遵循斩头去尾的原则，将初滤液置于一洗净并干燥的烧杯内，荡洗烧怀，全部弃去;再将续滤液接收入该荡洗过的烧怀内，移液管用该液荡洗三次，才能取该续滤液进行分析，以确保浓度的一致性。

6. 滴定

指示剂不能过早加入，否则由于碘量太多，遇淀粉形成蓝黑色，碘被包裹，终点不明锐，导致终点迟到。当溶液滴至淡黄色(可置于白瓷板上观察)时即可加淀粉指示液。

7. 样品和空白试验应遵循平行原则，即同时加试剂，同时反应，同时过滤等等。

四、实验后思考                                                  

1.在制剂分析和原料药分析中，取样量的描述不同。以乙酰水杨酸为例，原料药分析中：取本品约0.4克，精密称定，……；片剂分析中：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于乙酰水杨酸0.4克），……。请回答下列问题：

（1）    0.4克是怎样求得的？这里的“约”和“精密称定”是否矛盾？为什么？

（2）片剂分析中取样量为何如此规定？能否直接精密称定约0.4克的粉末进行分析，为什么？

2. 通过本实验试讨论复方制剂分析的特点。

 

第二篇：对乙酰氨基酚片的制备、含量测定与溶出速率测定

综合实验报告